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天然冰片、合成冰片及薄荷脑对P-糖蛋白的影响及其机制研究
作 者: 周金雯
导 师: 杨星昊
学 校: 南京师范大学
专 业: 微生物与生化药学
关键词: 天然冰片 合成冰片 薄荷脑 P-糖蛋白 Caco-2
分类号: R285
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
一、目的研究天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)功能及表达的影响,并评价天然冰片与合成冰片的区别。为这三种活性成份的配伍应用及其新药研发提供依据。二、方法1.细胞毒性实验采用MTT法进行细胞毒性实验,使实验过程中采用的细胞活性>98%。2. Rhodamine 123 (Rh123)积累与外排实验用酶标仪测定P-gp底物Rh123在Caco-2细胞中积累的变化,再进一步测定其外排的变化,以确定天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp的功能的影响。3.P-gp与MDR1 mRNA的表达测定采用Western blot与RT-qPCR方法分析天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Caco-2细胞中P-gp与MDR1mRNA表达水平的影响。三、结果1.细胞毒性实验确定了本实验条件下各自的实验浓度范围(与Caco-2细胞孵育48h后,细胞活性>98%):天然冰片(5-65μM)、合成冰片(5-35μM)及薄荷脑(2-5μM)。2.Rh123积累与外排实验药物与Caco-2细胞孵育48h后,细胞中Rh123的积累量与冰片的浓度呈正相关。天然冰片(5-35μM)或合成冰片(10-35μM)能显著增加Rh123的积累量。药物与Caco-2细胞孵育1h后,低浓度(5、10μM)的天然冰片与合成冰片对Rh123的外排没有影响。高浓度(20、35μM)的天然冰片或合成冰片使Rh123的外排量显著增加。薄荷脑(2、5、10、20μM)对细胞中Rh123的量没有显著性影响。3.P-gp与MDR1 mRNA的表达测定天然冰片或合成冰片(35μM)与Caco-2细胞孵育48 h后,Caco-2细胞中P-gp与MDR1 mRNA的表达量显著下降。天然冰片与合成冰片的作用未见显著性差异。薄荷脑(5μM)对细胞中P-gp与MDR1 mRNA的表达量没有显著性影响。四、结论1.天然冰片或合成冰片可以通过抑制MDR1 mRNA的表达水平而下降P-gp的水平,从而影响P-gp转运功能。2.实验中薄荷脑对P-gp的表达与功能均无明显作用,提示其不是P-gp抑制剂。3.天然冰片或合成冰片与P-gp底物合用可能会产生药物相互作用,临床效果有待进一步验证。4.天然冰片或合成冰片可能成为多药耐药抑制剂,辅助肿瘤化疗。
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全文目录
摘要 3-5Abstract 5-10第1章 绪论 10-16 1.1 P-gp简介 10-12 1.2 Caco-2细胞模型简介 12-13 1.3 冰片、薄荷脑的研究现状 13-16 1.3.1 冰片的研究现状 13-14 1.3.2 薄荷脑的研究现状 14-16第2章 设计思想与技术路线 16-18 2.1 设计思想 16 2.2 技术路线 16-18 2.2.1 Caco-2细胞模型的建立及检测 16 2.2.2 药物的确定 16-17 2.2.3 工作液浓度的确定 17 2.2.4 Rh123积累与外排研究 17 2.2.5 P-gp与MDR1 mRNA表达研究 17-18第3章 Caco-2细胞培养及模型建立 18-24 3.1 实验仪器与材料 18-19 3.1.1 仪器 18 3.1.2 细胞株 18 3.1.3 药品与试剂 18-19 3.2 实验方法 19-22 3.2.1 相关试剂配制 19-20 3.2.2 细胞培养 20-21 3.2.3 Caco-2细胞单层模型的建立 21 3.2.4 细胞模型评价 21-22 3.3 结果 22-23 3.4 讨论 23-24第4章 细胞毒性实验 24-30 4.1 实验仪器与材料 24-25 4.1.1 仪器 24-25 4.1.2 药品与试剂 25 4.2 实验方法 25-26 4.2.1 相关试剂配制 25 4.2.2 MTT实验 25-26 4.2.3 色谱条件 26 4.2.4 样品测定 26 4.3 数据处理 26 4.4 结果 26-29 4.4.1 MTT实验结果 26-28 4.4.2 气相实验结果 28-29 4.5 讨论 29-30第5章 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp功能的影响 30-39 5.1 实验仪器与材料 30-31 5.1.1 仪器 30-31 5.1.2 药品与试剂 31 5.2 实验方法 31-33 5.2.1 相关试剂配制 31 5.2.2 BCA法蛋白含量测定 31-32 5.2.3 荧光淬灭或增强作用考察 32 5.2.4 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内积累的影响 32 5.2.5 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内外排的影响 32-33 5.3 数据处理 33 5.4 结果 33-36 5.4.1 荧光淬灭或增强作用考察 33 5.4.2 蛋白标准曲线的建立 33-34 5.4.3 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内积累的影响 34-35 5.4.4 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对Rh123细胞内外排的影响 35-36 5.5 讨论 36-39第6章 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp及MDR1 mRNA表达的调控 39-57 6.1 实验仪器与材料 39-40 6.1.1 仪器 39-40 6.1.2 药品与试剂 40 6.2 实验过程 40-49 6.2.1 相关试剂配制 40-43 6.2.2 细胞培养及加药 43 6.2.3 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp表达量的影响 43-45 6.2.4 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对MDR1 mRNA表达量的影响 45-49 6.3 数据处理 49 6.4 结果 49-54 6.4.1 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对P-gp表达量的影响 49-50 6.4.2 天然冰片、合成冰片、薄荷脑对MDR1 mRNA表达的影响 50-54 6.5 讨论 54-57第7章 总结 57-58参考文献 58-63致谢 63
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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