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5和5/F35型腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞感染效率的比较

作　者: 陈鹏
导　师: 谭晓华
学　校: 第三军医大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 骨髓间充质干细胞腺病毒载体 5型和5/F35杂合型感染效率
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

【目的】:探讨5和5/F35型腺病毒载体对体外培养的人骨髓间充质干细胞(Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells, hBMSCs)的感染效率。【方法】:实验于2008-03/2008-10在解放军北京军区总医院血液科实验室完成。先用淋巴细胞分离液分离健康供者的骨髓单个核细胞,然后采用密度梯度离心和贴壁筛选的方法体外分离培养hBMSCs,传至第3代后用流式细胞仪检测hBMSCs表型;按1×104密度接种于24孔板,细胞贴壁后分别换用成骨、成脂诱导液培养,以碱性磷酸酶、油红O染色检测其分化特性。用不同滴度编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(Ad5 EGFP和Ad5/F35 EGFP)感染体外培养的hBMSCs和人白血病细胞系(K562,U937和HL60),荧光显微镜观察、流式细胞仪检测EGFP阳性表达率,并用台盼蓝拒染法检测不同病毒滴度感染后hBMSCs活细胞比例。【结果】:hBMSCs表面CD166、CD29、CD73、CD31、CD45、CD34和CD14阳性率分别为95.08%、99.53%、72.26%、1.5%、2.02%、3.8%和4.94%。hBMSCs成骨诱导后14 d碱性磷酸酶染色为阳性,成脂诱导后14 d油红O染色为阳性,提示hBMSCs已分化为成骨细胞和脂肪细胞。Ad5 EGFP和Ad5/F35 EGFP按5、20、100和400感染复数(MOI)分别感染hBMSCs,2d后流式细胞仪检测EGFP表达的阳性率,前者EGFP阳性率分别为(0.72±0.14)%、(4.97±0.46)%、(9.80±3.43)%和(45.53±6.32)%;后者EGFP阳性率分别为(24.31±10.55)%、(55.19±13.73)%、(87.68±9.5)%和(96.57±5.64)%。在5、20和100 MOI,各组细胞存活率均在95%以上。在400 MOI,细胞存活率明显降低,在90%以下。对人白血病细胞系(K562,U937和HL60)在MOI为100时Ad5/F35载体的感染效率大于50%,Ad5载体不能有效感染人白血病细胞系(K562,U937和HL60)。【结论】:5和5/F35型腺病毒载体对hBMSCs的感染效率有明显差别。两型腺病毒载体感染hBMSCs的效率与病毒的感染复数成正比,感染复数愈高其感染hBMSCs的效率愈高;在相同的感染复数时,5/F35型腺病毒载体感染hBMSCs和人白血病细胞系(K562,U937和HL60)的效率明显地高于5型腺病毒载体。5/F35型腺病毒载体在以hBMSCs为种子细胞的细胞和基因治疗中有良好的应用前景。

全文目录

英文摘要  5-7
中文摘要  7-9
论文正文 5和5/F35 型腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞感染效率的比较  9-41
  前言  9-12
  第一部分：人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）的分离、纯化、培养和鉴定  12-21
    1 材料和方法  14-17
    2 结果  17-20
    3 讨论  20-21
  第二部分：5 和5/F35 型腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞感染效率的比较  21-29
    1 材料和方法  22-24
    2 结果  24-27
    3 讨论  27-29
  第三部分：5 和/5F35 型腺病毒载体对人白血病细胞系感染效率的比较  29-35
    1 材料和方法  30-32
    2 结果  32-34
    3 讨论  34-35
  结论  35-36
  参考文献  36-40
  致谢  40-41
附录  41-49
  文献综述  41-46
  综述参考文献  46-49
  研究生阶段发表论文  49

5和5/F35型腺病毒载体对人骨髓间充质干细胞感染效率的比较

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