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蜗轴螺旋动脉平滑肌的培养及其鉴定

作　者: 王烨
导　师: 邱建华
学　校: 第四军医大学
专　业: 耳鼻喉科学
关键词: 贴壁培养法酶消化法蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

1.目的本研究的目的是通过联合两种常用的细胞培养方法(酶消化培养法和组织贴壁培养法),建立了一个体外的蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞原代培养的模型。2.方法2.1用于进行实验的的蜗轴螺旋动脉的平滑肌来自于豚鼠。将蜗轴螺旋动脉血管组织切碎并且放入37度二氧化碳培养箱中在溶液浓度为0.1%胰蛋白酶溶液中消化20分钟。接着,将这些消化后的血管组织块在35-mm的培养皿中贴壁,组织块中间间隔3-5mm。2.2联合运用这两种细胞培养方法,我们发现其中混杂的细胞几乎都为成纤维细胞,所以如何去除成纤维细胞是本实验需要克服的问题。经过查阅文献和多次的实践,我们将蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞原代培养过程中混杂的成纤维细胞通过其与血管平滑肌细胞不同的贴壁能力和成纤维细胞对无血清的培养液不耐受,因为可在在传代的时候被去除。当35mm培养皿中细胞长满80%-90%的时候,就可以进行传代。在传代过程中应用上述的去除成纤维细胞的方法。我们将细胞悬液加入到35mm的培养皿中,15分钟后,吸出液体。将吸出的液体加入另外一个35mm的培养皿中,静置15分钟。吸出液体并加入到第三个35mm的培养皿中。收集第二和第三个培养皿继续培养。反复应用纯化的程序,可以在第三代得到纯的并且活性好的蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞。3.结果3.1通过倒置显微镜的观察,我们发现在7-10天后,可以见到有细胞从组织块中长出来。大约在3周左右,这些细胞可长满培养皿,大约在细胞长满培养皿80%-90%时,可以进行传代。通过方法中介绍的血管平滑肌细胞纯化的方法,在第三代培养的血管平滑肌细胞中,纯的并且活性好的细胞可以被获得。3.2经过形态学,免疫荧光化学对于上述方法得到的蜗轴螺旋动脉血管血管平滑肌细胞进行了鉴别。这些细胞呈现梭形的细胞形态,每个细胞含有1-2个核。结果显示了典型的平滑肌的细胞的特点:形态学显示了平滑肌细胞在细胞密度大的时候出现的典型的“峰-谷”样的生长形态。免疫荧光化学显示这些原代培养的蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞表达平滑肌细胞的特异性标志物(α-SM- actin和myosin)。3.3透射电镜结果显示的培养的蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞中具有密斑,密体,肌丝这些平滑肌细胞的标志性结构。4.结论本文通过联合两种常见的细胞培养方法,建立了一种有效并且简单的细胞培养方法。应用这种原代培养的方法,大量纯的并且活性良好的蜗轴螺旋动脉血管平滑肌细胞可以在原代培养第三代的时候得到。这些血管平滑肌细胞是一个很好的研究血管平滑肌细胞在内耳循环紊乱过程生理功能的一个体外模型。除此之外,这些活性良好的平滑肌细胞还可以是一些作用于血管平滑肌药物评价的体外模型。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
前言  13-14
文献回顾  14-23
  一、许多研究表明噪声性聋、美尼尔病和突发性耳聋等的发生与内耳血流紊乱有密切关系  14-15
  二、血管收缩的机制  15-16
  三、平滑肌细胞  16-18
    1. 平滑肌纤维的光镜结构  16-17
    2. 平滑肌纤维的超微结构  17-18
  四、常用的血管平滑肌细胞培养方法  18-20
  五、SMA 分离培养的研究进展  20-21
  六、H2S:一种新的气体信号分子  21-23
正文蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞的培养  23-35
  1 材料  23-24
  2 蜗轴螺旋动脉平滑肌细胞的培养  24-26
  3 结果  26-31
  4 讨论  31-35
小结  35-37
参考文献  37-42
个人简历和研究成果  42-43
致谢  43

蜗轴螺旋动脉平滑肌的培养及其鉴定

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