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Cx43与Bax、Bcl-2在胎膜早破患者胎膜组织中的表达及意义

作　者: 王艳艳
导　师: 崔世红
学　校: 郑州大学
专　业: 妇产科学
关键词: 胎膜早破 Cx43 Bax Bcl-2 细胞凋亡
分类号: R714.433
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

胎膜早破(premature rupture of memberane,PROM)是指胎膜破裂发生在临产前。如发生在妊娠满37周后,称足月胎膜早破(term premature rupture ofmemberane,tPROM),而发生在妊娠不满37周者,称足月前胎膜早破(pretermpremature rupture of memberane,pPROM)。PROM可引起早产、母婴感染、脐带脱垂等诸多并发症,增加了围生期母儿发病率和死亡率,是威胁母儿健康的常见产科并发症之一。但确切病因及发病机制尚不明确,这为临床上有效预防PROM的发生带来了极大困难。近年来对细胞因子、细胞凋亡、酶类与PROM关系的研究较多且已达到了分子生物学水平,但对胎膜本身发育方面的研究相对较少。间隙连接是普遍存在于动物组织细胞间的一种通讯方式,主要是由间隙连接蛋白(connexin,Cx)构成,对细胞的增殖分化、凋亡、维持内环境稳态及机体的新陈代谢、生长发育等生理功能起重要调控作用。Cx与细胞生长发育及增殖分化等密切相关,是维持机体组织器官正常结构及功能的基础。Cx的正常表达和异常表达,可直接影响细胞及组织、器官的功能状态。Cx分为很多亚型,其中分布最广泛的是Cx43。细胞凋亡与组织器官的发育和机体正常生理活动的维持有关,研究表明细胞凋亡与PROM的发生密切相关,B细胞淋巴瘤/白血病(B-cell lymphoma/leukemia,Bcl)家族中的Bcl-2蛋白可以抑制细胞凋亡,而Bax蛋白可以促进细胞凋亡,但两者是否参与胎膜组织细胞凋亡的调控,文献报道并不一致。目的本研究采用免疫组化(PV-9000)法检测Cx43与Bax、Bcl-2在PROM患者胎膜组织中的表达,分析Cx43与Bax、Bcl-2表达的相关性,探讨三者在PROM发病机制中的作用及其相互关系;分析研究Cx43在胎膜组织中的正常或异常表达与胎膜组织本身生长发育的关系,同时进一步证实Bax、Bcl-2是否参与胎膜组织中细胞凋亡的调控及其所介导的细胞凋亡在PROM发病机制中的作用;对pPROM和tPROM进行对比分析研究,探讨两者发病机制的异同。为PROM的预防提供理论依据。材料与方法选择2007年10月～2008年04月在郑州大学第三附属医院产科住院分娩的妊娠32周～42周孕妇60例。30例发生胎膜早破(PROM组),其中足月前胎膜早破15例(pPROM组),足月胎膜早破15例(tPROM组);30例未发生胎膜早破(正常对照组)。三组病例均于临产前行剖宫产术,胎盘胎膜娩出后10min内取人工胎膜破口靠近宫颈处且距破口边缘约＞1cm处2cm×2cm大小胎膜全层一块,PROM组剪取胎膜时避开胎膜自然破裂口。标本采集后即用生理盐水冲净血迹及羊水,置入10%甲醛溶液中固定,石蜡包埋,3μm连续切片5张备用。PROM的诊断标准参考丰有吉、沈铿主编的8年制人民卫生出版社第1版《妇产科学》。常规HE染色后在光镜下进行形态学观察。采用免疫组化(PV-9000)法检测Cx43与Bax、Bcl-2在胎膜组织中的表达。PV阳性标准:光学显微镜下胎膜组织细胞膜和/或细胞浆及细胞核呈黄色或棕黄色颗粒者为阳性表达。采用Biosens Digital Imaging System图像分析仪、leica Qwin软件进行图像采集分析,以阳性区平均灰度值为检测指标,每张免疫组化切片随机选取5个高倍视野(10×40),计算其阳性区平均灰度值。整个图像采集过程由同一人操作。本实验所有数据均采用SPSS10.0软件包进行统计学处理,所得数据以均数±标准差((?)±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验,指标间相关性采用直线相关分析,以α=0.05为检验水准。结果1、HE染色结果:HE染色后对胎膜组织进行形态学观察发现,PROM组中胎膜组织的结构发生了明显改变,组织完整性差,多见羊膜层和绒毛膜层分离,羊膜层连续性差、上皮细胞排列紊乱,羊膜层部分缺失,胶原纤维及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)呈无序状态并减少;而正常对照组胎膜组织结构相对完整,羊膜及绒毛膜层轻轻贴附,层次清楚,厚度均匀,羊膜层上皮细胞连续性好,胶原纤维及ECM排列整齐,无明显缺失。2、免疫组化(PV-9000法)结果:三组胎膜组织中均可见Cx43与Bax、Bcl-2呈不同程度的阳性表达。Cx43主要定位于绒毛膜滋养细胞的细胞膜、细胞浆及部分细胞核中,羊膜上皮细胞有少许表达;Bax主要定位于绒毛膜滋养细胞和羊膜上皮细胞的细胞浆中;Bcl-2主要定位于绒毛膜滋养细胞的细胞膜和细胞浆中。Cx43在羊膜上皮的少许表达不做统计学处理。3、Cx43与Bax、Bcl-2在三组胎膜组织中的阳性表达:①tPROM组中Cx43的阳性表达明显低于正常对照组(P＜0.01);Bcl-2的阳性表达明显低于正常对照组(P＜0.01);而Bax的阳性表达高于正常对照组(P＜0.05),两组比较差异均有统计学意义。②pPROM组Cx43的阳性表达明显低于tPROM组,差异有统计学意义(P＜0.01);而Bcl-2、Bax在pPROM和tPROM两组的比较无统计学差异(P＞0.05)。4、PROM组中Cx43与Bax、Bcl-2表达水平的相关性:PROM组中Cx43的表达水平与Bax的表达呈负相关性(r=-0.309,P=0.016);而Cx43的表达水平与Bcl-2的表达无相关性(r=-0.199,P=0.145)。结论1、PROM患者胎膜组织中Cx43低表达介导的胎膜组织发育异常,Bax高表达和Bcl-2低表达介导的细胞凋亡可能与PROM的发生有关;2、PROM患者胎膜组织中Cx43和Bax表达的相关性提示两者可能起协同作用促使PROM的发生;3、pPROM的发生可能更倾向于胎膜组织发育异常;tPROM的发生可能与胎膜的退行性变及胎膜细胞过度凋亡有关;提示两者可能有不同的发病机制。

全文目录

摘要  3-7
Abstract  7-12
论文部分  12-38
  前言  12-14
  材料与方法  14-19
  结果  19-21
  讨论  21-29
  结论  29-30
  附图  30-33
  参考文献  33-38
综述  38-51
  胎膜早破病因及机制的研究进展  38-47
  参考文献  47-51
英文缩略词表  51-52
攻读硕士学位期间发表论文  52
待发表论文  52-53
致谢  53

Cx43与Bax、Bcl-2在胎膜早破患者胎膜组织中的表达及意义

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