学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

海藻糖基因表达载体构建及转化洋桔梗研究

作　者: 何毅敏
导　师: 陈丽梅
学　校: 昆明理工大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 转基因植物耐盐基因工程海藻糖合成洋桔梗
分类号: S681.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 37次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

盐害是影响植物生长和作物产量的主要因素。海藻糖在非生物胁迫下可以稳定生物结构。但是在大多数植物中海藻糖积累量都很低。在细菌和酵母中,海藻糖是通过海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)和海藻糖-6-磷酸磷酸酶(TPP)合成的。otsA和otsB是大肠杆菌海藻糖生物合成的两个基因。洋桔梗(Eustoma grandiflorum)为一种用途广泛的花卉,具有较高的观赏价值和经济价值。云南的洋桔梗栽培多以大棚和温室种植为主,易受到土壤盐碱化的作用,不利于洋桔梗的生长。本研究期望通过遗传操作在植物中过量表达海藻糖-6-磷酸合酶/海藻糖-6-磷酸磷酸酶融合基因,获得耐盐性提高的植物育种新材料。本研究通过植物基因工程技术,构建了3个大肠杆菌海藻糖合成基因的光诱导型植物表达载体(PrbcS启动子控制)：海藻糖-6-磷酸合酶(tps基因)植物表达载体pK2-PrbcS-tps,海藻糖-6-磷酸磷酸酶(tpp基因)pH2-PrbcS-tpp和海藻糖-6-磷酸合酶/磷酸酶(tpsp基因)pH2-PrbcS-tpspo本研究还针对洋桔梗进行了抗生素浓度梯度试验和植物激素浓度梯度试验,确定适合洋桔梗的最佳生长条件(分化培养基为MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L,生根培养基为MS+IBAlmg/L+GA 0.2mg/L,头孢噻肟钠浓度为300mg/L,潮霉素浓度为10mg/L)。通过农杆菌介导法,我们用pH2-PrbcS-tpp和pH2-PrbcS-tpsp两种质粒转染洋桔梗的叶盘。本研究中共获得转tpsp基因的洋桔梗小苗42株,其中有10株小苗具有潮霉素抗性,经基因组PCR检测发现,有一株植物的基因组中整合了tpsp基因。但是tpsp基因在其他分子水平的表达情况还有待检测,它对洋桔梗生理生化指标的影响也需要进一步分析。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
插图和附表目录  10-12
缩略词  12-13
第一章前言  13-30
  1.1 盐害对植物的危害及目前国内的盐害情况  13
  1.2 盐胁迫对植物的危害  13-16
    1.2.1 盐胁迫对植物形态的影响  13-14
    1.2.2 盐胁迫对植物代谢的影响  14-16
  1.3 植物耐盐基因工程研究进展  16-24
    1.3.1 盐胁迫对植物信号传导的影响  16-18
    1.3.2 盐胁迫下植物中离子通道的变化  18-20
    1.3.3 盐胁迫对植物转录因子的作用  20
    1.3.4 小分子渗透剂的积累与植物耐盐性的关系  20-23
    1.3.5 植物体内抗氧化酶和盐胁迫的作用  23-24
    1.3.6 其他蛋白质和基因  24
  1.4 本研究的主要目的及意义  24-30
第二章材料与方法  30-41
  2.1 材料  30-33
    2.1.1 菌株及质粒  30
    2.1.2 植物材料  30-31
    2.1.3 主要试剂  31
    2.1.4 常用培养基配方  31-33
    2.1.5 常用抗生素贮液及使用浓度  33
  2.2 方法  33-41
    2.2.1 分子克隆技术  34-40
    2.2.2 植物遗传转化(农杆菌介导法)  40-41
第三章结果  41-61
  3.1 植物表达载体的构建  41-56
    3.1.1 tps基因植物表达载体的构建  41-44
    3.1.2 tpp基因植物表达载体的构建  44-52
    3.1.3 tpsp基因植物表达载体的构建  52-56
  3.2 tpsp及tpp基因转化洋桔梗的初步研究  56-59
    3.2.1 洋桔梗组织培养生根培养基的改良  56-58
    3.2.2 洋桔梗叶片抗生素敏感性测定  58-59
  3.3 转基因洋桔梗的鉴定  59-61
第四章讨论  61-66
  4.1 大肠杆菌海藻糖合成基因植物表达载体的构建  61-63
  4.2 农杆菌介导植物转基因及组织培养生根的初步研究  63
  4.3 本研究的前景和展望  63-66
第五章小结  66-67
致谢  67-68
参考文献  68-75
附录攻读硕士研究生期间发表论文  75

海藻糖基因表达载体构建及转化洋桔梗研究

内容摘要

全文目录

相似论文