学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

构建日本血吸虫抗原Sj23的毕赤酵母和转基因紫花苜蓿表达系统

作 者: 陈家丽
导 师: 鲁明波;余龙江
学 校: 华中科技大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 日本血吸虫疫苗 Sj23 毕赤酵母 紫花苜蓿 转基因植物疫苗
分类号: Q943.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 24次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


日本血吸虫病是一种严重危害人类健康的寄生虫病,具有感染率高,复发性强等特点。目前对血吸虫疾病的预防和治疗主要是通过消灭钉螺和药物吡喹酮化疗来实现的,但效果并不是很理想。当今疫苗已成为控制和治疗传染病的一种有力武器,因此高效、廉价的日本血吸虫疫苗的研制具有很强的经济价值和社会意义。毕赤酵母和转基因植物作为真核表达系统,用于生产疫苗均具有廉价、安全和有效等优点,已成为目前研究的热点。本实验通过分子生物学手段,分别建立了Sj23抗原基因的毕赤酵母和紫花苜蓿表达系统,以期望获得日本血吸虫蛋白质疫苗和可食用性植物疫苗。目前已取得了如下成果:(1)通过PCR扩增获得Sj23基因,构建了酵母表达载体pPIC9K-Sj23,对其进行了双酶切和测序验证,测序结果与登录号为M63706的日本血吸虫抗原基因序列同源性为99%,表明已成功构建酵母表达载体pPIC9K-Sj23。(2)通过LiCl法将重组酵母表达载体pPIC9K-Sj23转化到毕赤酵母GS115中,获得转化子。对所得阳性转化子进行PCR筛选,得到酵母重组菌株。将得到的酵母重组菌株进行甲醇诱导,发酵表达Sj23蛋白。取发酵上清进行SDS-PAGE分析,可获得Sj23表达的23KDa蛋白质条带,表明Sj23基因已成功转入毕赤酵母中并可表达。(3)在摇瓶水平上,对重组菌株诱导发酵条件进行了初步优化,得出以1.0%甲醇为诱导物,在30℃培养时的最适诱导时间为72 h,最适诱导pH为5.0。(4)通过农杆菌介导的方法将LBA4404(含pCAMBIA1303-Sj23)转化入紫花苜蓿外植体,利用直接器官发生的方法,采用MS+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA的激素组合诱导生芽,再使用50 mg/L的Hyg进行筛选得到抗性再生芽,最后在1/2 MS培养基上诱导生根得到再生植株。(5)提取再生植株的基因组DNA进行PCR验证,初步证明Sj23基因已整合到植物基因组中。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
1 绪论  9-18
  1.1 日本血吸虫病及其疫苗的研究进展  9-11
  1.2 毕赤酵母生产疫苗的研究进展  11-14
  1.3 转基因植物紫花苜蓿生产疫苗的研究进展  14-16
  1.4 研究意义与内容  16-18
2 毕赤酵母表达日本血吸虫抗原Sj  18-36
  2.1 实验材料  18-21
  2.2 实验方法  21-29
  2.3 实验结果  29-33
  2.4 讨论  33-36
3 紫花苜蓿表达日本血吸虫抗原Sj  36-44
  3.1 实验材料  36-37
  3.2 实验方法  37-39
  3.3 实验结果  39-41
  3.4 讨论  41-44
4 结论与展望  44-46
  4.1 结论  44
  4.2 展望  44-46
致谢  46-47
参考文献  47-54
附录1 攻读硕士学位期间发表的专利与论文  54-55
附录2 日本血吸虫抗原基因Sj23 的测序结果  55-57
附录3 载体图谱  57-58
附录4 图版  58-59
附录5 主要英文缩略词表  59

相似论文

  1. 杏鲍菇(Pleurotus eryngii)漆酶基因的体外诱变及在毕赤酵母中表达,TQ925
  2. 氮肥对紫花苜蓿根系形态发育的影响,S541.9
  3. 紫花苜蓿根系生长与地上部生长的相关性分析,S541.9
  4. 西藏地区紫花苜蓿和多年生黑麦草干草调制与贮藏技术的研究,S816.53
  5. Aspergillus niger Z-25葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母中的表达,Q78
  6. 香菇漆酶基因在毕赤酵母中的表达及对三苯甲烷类染料脱色的研究,TQ925
  7. 高温胁迫条件下紫花苜蓿抑制消减cDNA文库的构建与初步分析,S541.9
  8. 血红素加氧酶-1参与水杨酸对镉诱导的紫花苜蓿根部氧化胁迫的调节作用,S541.9
  9. 拮抗酵母菌抑菌机理及对草莓采后冷藏品质影响的研究,S668.4
  10. 多环芳烃污染土壤的植物—微生物联合修复效应,X53
  11. 光周期对不同秋眠类型紫花苜蓿phyA、phyB mRNA和植物激素含量的影响,S541.9
  12. 根霉中β-葡萄糖苷酶基因克隆及表达,Q78
  13. 太原盆地紫花苜蓿水分利用效率研究,S541.9
  14. 凝血因子Ⅷ在毕赤酵母中的表达,R554.1
  15. 转萝卜过氧化物酶基因RsPrx1酵母表达条件优化及其抗性机理研究,Q943.2
  16. 不同来源的谷胱甘肽合成酶对重组毕赤酵母合成谷胱甘肽的影响研究,TQ936.16
  17. 低温胁迫对紫花苜蓿根颈膜脂脂肪酸含量的影响,S541.9
  18. 日本血吸虫DNA疫苗在小鼠体内的代谢及时空表规律研究,S855.91
  19. 巴斯德毕赤酵母多糖的分离纯化及生物活性研究,Q936
  20. 壳聚糖内切酶基因在毕赤酵母中的高效表达,Q78
  21. 黑曲霉α-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达与定性,Q78

中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
© 2012 www.xueweilunwen.com