学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

亚洲百合‘布耐罗’抗病和抗衰老基因转化的研究

作　者: 刘伟
导　师: 贾桂霞
学　校: 北京林业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 百合 组织培养 抗病 抗衰老 转基因
分类号: S682.29
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 280次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本文以亚洲百合‘布耐罗’（‘Brunello’）为研究对象，通过对鳞片再生条件、抗生素筛选条件及农杆菌介导百合遗传转化条件的优化，建立了高效的再生及转化体系，并将IPT基因和NPR1基因导入百合，对转化再生植株进行了分子检测及生理指标分析，主要研究结果如下： 1、含NPR1基因的植物表达载体pB35SNPR1的构建。将来自拟南芥的NPR1基因插入到质粒载体pGreen0229中，构建含有卡那霉素抗性选择标记的植物表达载体pB35SNPR1（pGreen0229-35S-NPR1-GFP），并通过液氮冻融法将其导入农杆菌EHA105，用于百合的遗传转化试验。 2、运用正交试验设计，建立亚洲百合‘布耐罗’（‘Brunello’）鳞茎外植体高效再生体系。外植体以1‰（W／V）升汞溶液作为主要灭菌试剂时，内部鳞片其最适处理时间为9min，存活率为55％；中部和外部鳞片的最适处理时间均为15min，存活率分别为50％和45％。运用正交试验设计，筛选鳞茎最佳分化培养基为MS+6-BA2+NAA0.2mg／L，再生率达86.1％以上；筛选出小鳞茎叶的最佳分化培养基为MS+6-BA1+NAA0.2+2,4D0.1mg／L，再生率达78.9％； 3、以鳞片分化的小鳞茎叶基部作为遗传转化体系的受体材料，通过卡那霉素敏感性试验，确定了小鳞茎叶诱导不定芽卡那霉素临界致死浓度为100mg／L。对影响农杆菌转化效率几个主要因素进行的研究发现：选取分化15-20d的小鳞茎叶作为受体材料，在OD值为0.5的农杆菌菌液中侵染15min，侵染后共培养2d可获得较好的转化效果，转化率在16％左右；进一步研究发现，在菌液中添加50μmol／L乙酰丁香酮，在共培养基中添加100μmol／L乙酰丁香酮浓度时，转化率较不添加乙酰丁香酮高。 4、将含质粒pB35SNPR1的农杆菌EHA105与百合小鳞茎叶共培养，通过筛选培养，获得卡那霉素抗性植株，对22株转NPR1再生植株进行GFP荧光检测和PCR检测，其中12株为阳性，经GFP荧光检测和PCR检测表明，NPR1基因已经整合到百合基因组中。对20株转IPT再生植株进行PCR检测，其中11株为阳性。 5、对PCR检测呈阳性的转基因植株进行了生理指标检测，试验结果表明：转基因植株的抗病性和抗衰老性都较阴性对照高。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
本文缩略词(ABBREVIATION)  8-12
1 引言  12-23
  1.1 百合的育种目标  12-13
  1.2 转基因技术研究进展  13-20
    1.2.1 百合组织培养的研究进展  13-18
    1.2.2 百合基因转化体系的建立  18-19
    1.2.3 百合遗传转化技术  19
    1.2.4 展望  19-20
  1.3 IPT及 NPR1基因的应用现状  20-21
    1.3.1 IPT  20-21
    1.3.2 NPR1  21
  1.4 研究的技术路线  21-23
2 植物表达载体 PB35SNPR1的构建  23-34
  2.1 材料和方法  23-30
    2.1.1 材料  23-25
    2.1.2 方法  25-30
  2.2 结果与分析  30-34
    2.2.1 克隆基因  30-31
    2.2.2 植物表达载体pB35SNPR1的构建  31-32
    2.2.3 植物表达载体向农杆菌的转化及鉴定  32-34
3 百合再生体系的建立  34-41
  3.1 材料和方法  34-35
    3.1.1 材料  34
    3.1.2 试验方法  34-35
  3.2 结果与分析  35-41
    3.2.1 不同灭菌时间对外植体存活率的影响  35-36
    3.2.2 筛选诱导鳞片分化的最佳培养基  36-38
    3.2.3 筛选诱导小鳞茎叶分化的最佳培养基  38-41
4 百合遗传转化体系的建立与优化  41-49
  4.1 材料和方法  41-44
    4.1.1 材料  41
    4.1.2 方法  41-42
    4.1.3 转化方法和转化条件的优化  42-44
  4.2 结果与分析  44-49
    4.2.1 卡那霉素对小鳞茎叶基部分化不定芽的影响  44-45
    4.2.2 转化方法与转化条件的优化  45-47
    4.2.3 转NPR1、IPT基因卡那抗性植株的获得  47-49
5 转基因植株的 GFP检测  49-53
  5.1 GFP基因  49-50
    5.1.1 GFP的发现和结构  49
    5.1.2 GFP作为标记物的优点  49-50
    5.1.3 GFP作为报告基因用于转基因植物研究  50
  5.2 材料与方法  50
    5.2.1 材料  50
    5.2.2 方法  50
  5.3 结果与分析  50-53
    5.3.1 转 NPR1基因植株的GFP检测结果  50-53
6 转基因植株的 PCR检测  53-56
  6.1 材料与方法  53-54
    6.1.1 材料  53
    6.1.2 方法  53-54
  6.2 结果与分析  54-56
    6.2.1 转 NPR1基因植株的 PCR检测结果  54
    6.2.2 转 IPT基因植株的 PCR检测结果  54-56
7 转基因植株的生理指标检测  56-62
  7.1 材料与方法  56-59
    7.1.1 材料  56
    7.1.2 抗病性检测方法  56-58
    7.1.3 抗衰老性检测方法-HPLC法(液相色谱)  58-59
  7.2 结果与分析  59-62
    7.2.1 转 NPR1基因植株的抗病性检测  59-60
    7.2.2 转 IPT基因植株的抗衰老性检测  60-62
8 结论  62-63
参考文献  63-68
附1  68-71
附2:常用溶液配制及反应体系  71-73
附3:图版  73-77
导师简介  77-78
个人简介  78-79
致谢  79

相似论文

  1. 拟南芥胱硫醚-γ-合成酶（D-AtCGS）基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备,Q943.2
  2. 光调控对花烛组织培养及试管苗光合特性的影响,S682.14
  3. 天然来源的抗衰老先导化合物的化学结构及作用机理研究,R285.5
  4. 携带WSSV凡纳滨对虾的养殖和环境因子胁迫的研究,S945
  5. 能源植物绿玉树快速繁殖研究,Q949.93
  6. 利用RNAi提高烟草对病毒的抗性及岷江百合遗传转化体系的初步构建,S435.72
  7. 蝴蝶兰新品种‘恒巨双龙’花梗离体培养技术的研究,S682.31
  8. 转基因水稻对肉仔鸡饲用安全性研究,S831.5
  9. 豫西、豫北及冀南地区4个禾谷孢囊线虫群体种类和致病型鉴定及品种抗性研究,S435.121
  10. 超表达OsSsr1基因烟草的获得及其抗逆性分析,S572
  11. 转基因稻米及其米制品外源重组DNA的检测,S511
  12. 基因棉粕检测及其转基因成分在饲料加工工艺中的降解规律研究,S816
  13. 转基因食品中的伦理问题,B82-05
  14. 灰霉菌侵染拟南芥过程中ACD5的功能分析,S432.1
  15. 鲁豫皖交界地区四个CCN群体种类和致病型鉴定及品种对淮阳群体的抗性评价,S435.121
  16. 小麦近缘材料及CIMMYT种质资源对两种禾谷孢囊线虫的抗性鉴定,S512.1
  17. 玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆及功能验证,S513
  18. 转小麦类蛋白激酶基因TA50-10烟草及其抗病性分析,S572
  19. 豆梨组织培养过程中玻璃化形成机制及其恢复技术研究,S661.2
  20. 日光温室切花百合花期和外观品质的预测模型,S682.29
  21. 植物精油对草莓和杨梅果实保鲜的作用及机理研究,S667.6

中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺（花卉和观赏树木） > 多年生花卉类 > 球根花卉类 > 其他
© 2012 www.xueweilunwen.com