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莫尼茨属绦虫节片间部分差异基因表达的研究

作　者: 王利晓
导　师: 薄新文
学　校: 石河子大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 莫尼茨属绦虫 mRNA序列分析 mRNA表达差异分析类膜蛋白样基因原核表达
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本论文通过前期研究所构建的扩展莫尼茨绦虫基因的质粒文库,在表达量较大且节片间表达差异显著的基因中克隆了5个扩展莫尼茨绦虫功能基因进行研究。基因的质粒文库编号分别为SSBR88,SSBR116,SSBR126,SSBR210和SSBR614。基因克隆测序后获得5个基因的全长mRNA序列,登录GenBank并进行在线Blast分析。GenBank登录号为G0254238-G0254242。然后用生物信息学方法对基因进行分析并同时应用SYBR Green real-time PCR检测方法探讨基因在莫尼茨属两种绦虫成虫的头节、幼节、成节、孕节四个不同发育阶段组织的转录差异。最后对扩展莫尼茨绦虫孕节特有高表达的SSBR88类膜蛋白样基因通过构建表达载体进行蛋白质表达与初步分析。序列分析结果表明我们成功获得了5个基因的全长mRNA序列,经BLastX比对其中SSBR116、SSBR210分别和肝片吸虫的烯醇化酶和日本血吸虫的β微管蛋白的基因最高相似度分别达74.8%和80%,推测这两个基因分别为扩展莫尼茨绦虫的烯醇化酶和β微管蛋白基因。另外SSBR88,SSBR126,SSBR6143个基因与数据库中已有基因的相似性比较低,推测为扩展莫尼茨绦虫特有基因,根据蛋白结构分别推断为扩展莫尼茨绦虫的类膜蛋白样基因、类抗原蛋白样基因和类绒毛膜蛋白样基因。实时定量RT-PCR实验结果表明,5个基因在两种虫体上的mRNA表达差异趋势-致。烯醇化酶(SSBR116)的mRNA表达差异显著,其从高到低依次为成节、幼节、孕节、和头节。烯醇化酶作为糖代谢的主要酶类,提示其在虫体寄生过程中进行胞内物质代谢从而为生命活动提供能量起重要作用。β-微管蛋白(SSBR210)在成节的mRNA表达丰度最高,作为细胞微管结构和细胞分裂过程中纺锤体结构的基本组成成分,提示该基因对维持莫尼茨绦虫的细胞形态与功能和细胞分裂以及配子形成等具有重要作用。未知蛋白SSBR88作为类膜蛋白样基因,生物信息学分析为分泌表达的跨膜蛋白,其mRNA在孕节的表达丰度最高,提示该蛋白可能在虫卵形成过程中与卵膜结构的形成相关。另外,SSBR126作为新的类抗原蛋白样基因,其也在孕节的mRNA表达丰度最高,它的作用还有待进一步的实验验证。SSBR614在线分析和小鼠的绒毛膜有一定的相似性,其在成节的mRNA表达丰度最高,提示我们该基因与绦虫的雌性生殖器官某个结构的生成有关。本论文在构建扩展莫尼茨绦虫基因质粒文库的基础上,通过对其5个差异表达基因进行克隆和生物信息学分析,同时应用SYBR Green实时定量PCR技术检测基因在莫尼茨属两个虫种的组织表达分布,为探索莫尼茨属绦虫生长发育的分子作用机制建立理论基础。另外本文对扩展莫尼茨绦虫类膜蛋白样基因表达的研究,为以后对该基因生物学功能的深入研究提供了参考。

全文目录

摘要  5-6
英文摘要  6-9
主要中英文缩写词  9-10
引言  10-11
第一部分文献综述  11-24
  (一) 绦虫的分子生物学研究概况  11-16
  (二) 实时定量PCR技术及其在寄生虫学方面的应用  16-22
  (三) 烯醇化酶的研究进展  22-24
第二部分实验部分  24-65
  第一章扩展莫尼茨绦虫基因的克隆与序列分析  24-42
    1 材料与方法  24-25
    2 结果  25-39
    3 讨论  39-42
  第二章目的基因在莫尼茨属两种绦虫的mRNA表达分布研究  42-59
    1 材料与方法  42-46
    2 结果  46-56
    3 讨论  56-59
  第三章莫尼茨绦虫类膜蛋白样基因的原核表达与分析  59-65
    1 材料与方法  59-61
    2 结果与分析  61-64
    3 讨论  64-65
  第四章结论  65
创新点  65-66
参考文献  66-71
附录  71-73
致谢  73-74
研究资助  74-75
作者简历  75-76
导师评阅表  76

莫尼茨属绦虫节片间部分差异基因表达的研究

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