学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

酶生物色谱法在氨肽酶N抑制剂筛选中的应用研究

作　者: 李爱凤
导　师: 王唯红
学　校: 山东大学
专　业: 药物分析
关键词: 氨肽酶N 酶生物色谱法硅胶整体柱酶抑制剂药物筛选
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 21次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

氨肽酶N(APN)与原发肿瘤和继发肿瘤的生长、血管生成密切相关,甚至对肿瘤细胞的增殖分化过程亦起促进作用,抑制APN的活性可以有效的阻断肿瘤的侵袭和转移,因此,APN已成为抗肿瘤药物研究的靶点之一。酶生物色谱法是分子生物色谱法的一种,它以酶为色谱固定相,使效应成分的分离与筛选结合在一起,可以从混合物中筛选特定的效应成分。本课题以APN为靶点,制备了新的APN固定相,建立了APN的酶生物色谱法,为抗肿瘤药物的研究开发提供了新的筛选模型。全文分四章,主要研究工作和成果如下：1.采用组织提取法,以猪肾为原料,制备APN,采用盐析、柱层析技术进行了纯化,并对其生物化学和有关酶学性质进行了研究。结果表明,酶经纯化后比活为10.08 U/mg,酶得到了较好的分离纯化,能满足实验的要求。APN最适温度为50℃,在50～55℃范围内相对稳定性；最适pH为7.8,偏弱碱性；阳性抑制剂Bestatin的半数有效抑制浓度为10.351μM；以L-亮氨酰-p-硝基苯胺为底物,测得其Km值为0.55 mM。2.制备硅胶整体柱,并进行包覆和修饰,以其为载体对APN的固定化条件进行了研究,并对固定化APN的性质进行了研究。结果表明酶固定化的最佳pH为7.8,酶量为40 ml,反应时间为6 h；酶经固定化后,最适pH不变,仍为7.8,pH稳定范围增加,最适温度为55℃,稳定性增加。3.建立APN的酶生物色谱筛选模型,以Bestatin为阳性对照,对模型进行了验证,并采用此模型对35个新化合物进行了筛选。结果表明,在该筛选模型中,Bestatin对APN的抑制作用具有明显的量-效关系,存在浓度依赖性,证明该筛选模型可行；采用此模型进行筛选,为进一步的化合物结构修饰提供有效信息。

全文目录

中文摘要  8-9
ABSTRACT  9-11
符号说明  11-12
第一章前言  12-22
  1. 氨肽酶N  12-18
    1.1 APN结构  12-14
    1.2 APN水解底物的机理  14-15
    1.3 APN与肿瘤的关系  15-16
    1.4 APN抑制剂  16-18
  2. 酶生物色谱法  18-22
    2.1 载体  19-20
    2.2 固定化方法  20-22
第二章氨肽酶N的制备  22-30
  1. 实验部分  22-25
    1.1 仪器与材料  22
    1.2 溶液配制  22-23
    1.3 APN的制备  23-24
    1.4 APN性质研究  24-25
  2. 结果与讨论  25-29
    2.1 APN纯化结果  25-26
    2.2 APN性质研究  26-29
  3. 小结  29-30
第三章固定化氨肽酶N的制备及性质分析  30-43
  1. 实验部分  30-35
    1.1 仪器与材料  30-31
    1.2 硅胶整体柱的制备、包覆和修饰  31-33
    1.3 固定化APN的制备  33-34
    1.4 固定化APN的评价  34
    1.5 固定化APN性质研究  34-35
  2. 结果与讨论  35-41
    2.1 硅胶整体柱的制备、包覆和修饰  35-39
    2.2 APN固定化条件选择  39-40
    2.3 固定化APN性质研究  40-41
  3. 小结  41-43
第四章氨肽酶N分子生物色谱筛选模型的建立与应用  43-53
  1. 实验部分  43-45
    1.1 仪器与试剂  43-44
    1.2 筛选模型的建立  44-45
    1.3 筛选  45
  2. 结果与讨论  45-51
    2.1 筛选模型的建立  45-49
    2.2 筛选  49-51
  3. 小结  51-53
展望  53-54
参考文献  54-58
附录  58-63
致谢  63-64
攻读学位期间发表的学术论文  64-65
学位论文评阅及答辩情况表  65

酶生物色谱法在氨肽酶N抑制剂筛选中的应用研究

内容摘要

全文目录

相似论文