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白藜芦醇对HCN4参与编码的超极化激活的阳离子通道的抑制作用

作　者: 万瑞峰
导　师: 马季骅
学　校: 武汉科技大学
专　业: 生理学
关键词: 白藜芦醇 HCN4 If通道电流双微电极电压钳
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:本研究的目的是探讨白藜芦醇(Resveratrol)对超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel,HCN)基因家族亚型HCN4参与编码的超极化激活的阳离子通道电流(If)的影响,并试图鉴定其作用位点,探讨作用机制。方法:提取HCN4质粒DNA,并体外转录成mRNA,之后将转录好的mRNA表达在非洲爪蟾卵母细胞上,并使用标准的双电极电压钳技术研究。结果:HCN4参与编码的超极化激活的阳离子通道电流被白藜芦醇的抑制具有浓度和电压依赖性(半最大抑制浓度[IC50值] = 83.75 umol/L)。稳态激活和失活参数在160umol/L的白藜芦醇存在时向更正的方向移动。状态依赖性的测试中,发现电压依赖性If的封锁发生迅速。在本实验中,我们发现,10nmol/L异丙肾上腺素对HCN4参与编码的超极化激活的阳离子通道电流具有正性作用,可使电流表达增强超过50%,加入160umol/L白藜芦醇后我们发现,白藜芦醇对增强电流的也有很强的抑制作用。结论:白藜芦醇对HCN4参与编码的超极化激活的阳离子通道具有明显的抑制作用。并且,白藜芦醇对异丙肾上腺素增强的HCN4参与编码的超极化激活的阳离子通道电流也具有明显的抑制效果,提示白藜芦醇可能对交感神经活动亢进或儿茶酚胺增多所引起的心律失常具有一定的治疗效果提供了一定的临床参考价值。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第一部分  8-20
  第一章前言  8-11
    1.1 实验仪器  10
    1.2 实验溶液配方  10-11
    1.3 药物  11
    1.4 实验动物  11
    1.5 实验试剂  11
  第二章材料和方法  11-14
    2.1 HCN4 在性成熟的非洲爪蟾卵母细胞上的表达  11-13
      2.1.1 HCN4 参与编码的超极化激活的阳离子通道质粒载体DNA 转化、提取和鉴定  11
      2.1.2 HCN4 参与编码的超极化激活的阳离子通道基因的体外转录与表达  11-12
      2.1.3 HCN4 参与编码的超极化激活的阳离子通道在非洲爪蟾卵母细胞上的表达  12-13
    2.2 电生理记录  13
    2.3 数据分析  13-14
  第三章实验结果  14-18
    3.1 HCN4 参与编码的If 通道的鉴定  14
    3.2 白藜芦醇对HCN4 参与编码的If 通道抑制作用的浓度依赖性  14-15
    3.3 白藜芦醇对HCN4 参与编码的If 通道抑制作用的电压依赖性  15-16
    3.4 白藜芦醇对加入异丙肾上腺素作用后HCN4 通道的抑制作用  16-18
  第四章讨论  18-19
  第五章结论  19-20
第二部分  20-36
  1 Introduction  21-23
  2 Materials and methods  23-27
    2.1 material  23-24
      2.1.1 Experimental solution formulations  23
      2.1.2 Drugs  23-24
      2.1.3 Experimental animals Sexually mature female Xenopus laevis, purchased from Institute of Genetics and Developmental Biology.  24
    2.2 methods  24-27
      2.2.1 nvolved in encoding HCN4 hyperpolarization activated cation channel plasmid DNA transformation, extraction and identification  24
      2.2.2 Involved in encoding HCN4 hyperpolarization activated cation channel gene transcription and expression in vitro  24-25
      2.2.3 Involved in encoding HCN4 hyperpolarization activated cation channel in Xenopus oocytes expression  25-26
      2.2.4 Electrophysiological recording  26
      2.2.5 Data Analysis  26-27
  3. Rsults  27-31
    3.1 HCN4 channels involved in the identification of coding  27-28
    3.2 Resveratrol HCN4 channels in coded concentration-dependent inhibition  28
    3.3 Resveratrol HCN4 channel in encoding voltage-dependent inhibition  28-30
    3.4 The effect of resveratrol on after adding isoproterenol inhibition of HCN4 channels  30-31
  4 discussion  31-32
  5 Acknowledgements  32-33
  References  33-36
第三部分综述  36-46
  摘要  36
  Abstract  36-37
  前言  37
  一、 HCN4 基因及其蛋白的结构特点概述  37-38
  二、 HCN 的生理作用及HCN4 特性  38-39
  三、 HCN4 的心脏起搏机制  39-40
  四、HCN4 与遗传性心律失常  40-41
  五、HCN4 与获得性心律失常  41
  六结束语  41-43
  参考文献  43-46
致谢  46

白藜芦醇对HCN4参与编码的超极化激活的阳离子通道的抑制作用

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