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靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA超声造影剂的制备及特性研究

作　者: 叶鸣
导　师: 王志刚
学　校: 重庆医科大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: 重组腺病毒聚乙二醇修饰 PLGA 超声造影剂共价结合 PLGA-COOH造影剂靶向
分类号: R445.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:1、制备包载经聚乙二醇(PEG)修饰的rAd-EGFP-HIF-1a重组腺病毒的乳酸/羟基乙酸共聚物(Polylactic-co-glycolic acid,PLGA)超声造影剂。2、检测该PLGA超声造影剂的物理性质、体外释放病毒规律、体外释放病毒转染效率及其产生的免疫反应程度。方法:1、重组腺病毒的PEG修饰,制得PEG-Adv。2、采用双乳化法制备载PEG-Adv和载Adv的PLGA超声造影剂。3、采用扫描电子显微镜观察该两种超声造影剂的表面形态;使用Malvern激光粒径测量仪检测该造影剂粒径分布频率及均值;紫外分光光度计测定其包封率及体外释放病毒规律;用ELISA法检测其产生的免疫反应程度。结果:1、按每个病毒颗粒衣壳蛋白质含7500个赖氨酸残基计算活化的甲氧基聚乙二醇(mPEG-SPA)用量,mPEG-SPA与Lys为1:1摩尔比加入相应量得mPEG-SPA,制得PEG-SPA。2、载PEG-Adv的PLGA和载Adv的PLGA分布均匀,形态相似,平均粒径分别为6.23±1.2μm、6.19±1.0μm;包封率分别为17.23%、14.35%;PEG-Adv和单纯Adv从PLGA释放规律相似,但从PLGA释放出来的PEG-Adv的转染效率比从PLGA释放出来的单纯Adv要高;包载PEG-Adv的PLGA产生的免疫反应强度也较低。结论:用PLGA超声造影剂包载PEG化的重组腺病毒rAd-EGFP/ HIF-1α,可改善Adv在体内安全性差的缺点,释放出来的病毒稳定性好,转染效率较高,其作为心血管疾病的基因治疗载体具有较好的研究前景。第二部分结合单克隆抗体的靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA造影剂的制备及其体外寻靶实验目的:采用共价结合的方法制备靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂,并考察其体外寻靶能力。方法:采用EDC/NHS[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺]作为偶联活性剂,以碳二亚胺法将包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂表面上的羧基与抗人E-seletin单克隆抗体上的氨基共价结合,制备靶向高分子超声造影剂;采用光学显微镜观察该靶向PLGA-COOH造影剂与人脐静脉血管内皮细胞在体外的寻靶结合能力。结果:体外寻靶实验显示,该靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH超声造影剂能聚集并牢固结合到人脐静脉血管内皮细胞表面。结论:采用碳二亚胺法,通过共价结合的方法,成功制备出靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂,该靶向造影剂在体外具有较强的特异性寻靶结合能力。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-10
英文摘要  10-13
前言  13-16
  参考文献  15-16
第一部分包载经 PEG 修饰的重组腺病毒 PLGA 超声造影剂的制备及特性研究  16-38
  第一节包载经PEG 修饰的重组腺病毒PLGA 超声造影剂的制备  16-22
    1 材料和方法  16-20
    2 结果  20-22
  第二节包载经PEG 修饰的重组腺病毒PLGA 超声造影剂的特性研究  22-30
    1 材料与方法  22-26
    2 结果  26-29
    3 讨论  29-30
  参考文献  30-31
  附图  31-38
第二部分结合单克隆抗体的靶向包载经PEG 修饰的重组腺病毒PLGA 造影剂的制备及其体外寻靶实验  38-47
  1 材料与方法  38-41
  2 结果  41-42
  3 讨论  42-43
  参考文献  43-44
  附图  44-47
全文总结  47-50
文献综述  50-59
  参考文献  56-59
致谢  59-60
攻读学位期间发表的学术论文、参研项目、学术交流等  60

靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA超声造影剂的制备及特性研究

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