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微泡造影剂与共聚物P85联合超声辐照对HepG2细胞基因转染的影响

作　者: 张喜君
导　师: 李开艳
学　校: 华中科技大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: 共聚物超声造影剂基因转染
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨共聚物P85与黏附增强型绿色荧光蛋白质粒(plasmid enhanced green fluoresent protein, pEGFP)的微泡造影剂(microbubble ,MB)结合后联合一定强度的超声(ultrasound,US)辐照,是否增强人肝癌细胞(HepG2)的质粒转染及表达。方法以人肝癌细胞(HepG2)为研究对象,质粒DNA是可产生绿色荧光蛋白的pEGFP,添加微泡造影剂或共聚物P85后进行脉冲多普勒超声辐照(超声使用参数:频率1 MHz,脉冲重复频率100 Hz,声强1 W/cm2,工作周期20%,时间20 s)。24 h后台盼蓝染色评价细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞仪评价细胞的基因转染率。结果有超声辐照组的pEGFP转染率明显高于无超声辐照组(P<0.01),有超声辐照组中pEGFP+30%MB+P85+US组转染效率(22.14±3.06)%优于单独使用微泡组(11.34±2.2)%或P85组(9.72±1.21)% (P<0.01)。结论微泡造影剂与共聚物P85结合同时联合超声辐照可增强基因转染效率,在基因治疗上值得关注和研究。目的不同浓度超声微泡造影剂(MB)结合共聚物p85后联合一定强度超声(ultrasound,US)辐照,初步摸索最适人肝癌细胞HepG2质粒转染及表达的MB浓度。方法以人的肝癌细胞(HepG2)为研究对象,以绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent protein,EGFP)质粒为报告基因,添加共聚物P85和不同浓度的微泡后进行脉冲多普勒超声辐照(超声使用参数:频率1 MHz,脉冲重复频率:100 Hz,声强1 W/cm2,工作周期20%,时间20 s)。24 h后台盼蓝染色使用血细胞计数板计数评价细胞存活率,荧光显微镜下观察pEGFP的表达情况,流式细胞仪定量评价细胞的基因转染率。结果pEGFP+P85+US组基因转染效率为(9.72±1.21)%,添加微泡造影剂后基因转染率均较该组转染效率高。随着微泡浓度的增加,细胞的基因转染率提高但是细胞的存活率明显降低,微泡浓度在30%时达到较理想的转染效率(22.14±3.06)%,且细胞存活率无明显下降(55.73±3.32)%。结论微泡造影剂与共聚物P85结合同时给予超声辐照可增强基因转染效率,且在微泡浓度为30%时达到较理想的转染效率。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-10
前言  10-12
第一部分共聚物P85 联合超声微泡介导基因转染的体外实验研究  12-20
  资料与方法  12-13
  结果  13-14
  讨论  14-16
  参考文献  16-18
  附图  18-20
第二部分不同浓度超声微泡结合共聚物p85 对人肝癌细胞 HepG2 基因转染的影响  20-27
  材料与方法  20-22
  结果  22
  讨论  22-23
  参考文献  23-26
  附图  26-27
全文总结  27-29
综述共聚物的应用和研究进展  29-38
  参考文献  34-38
附录硕士在读期间发表文章.  38-39
致谢  39

微泡造影剂与共聚物P85联合超声辐照对HepG2细胞基因转染的影响

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