学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

乳糖化—去甲斑蝥素磷脂复合物pH敏感型脂质体的研究

作　者: 周奕
导　师: 张学农
学　校: 苏州大学
专　业: 药剂学
关键词: 乳糖化-去甲斑蝥素 磷脂复合物 脂质体 pH敏感性 肝靶向
分类号: R943
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 34次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的:合成乳糖化-去甲斑蝥素(lactosyl-norcantharitin,Lac-NCTD)磷脂复合物,从而提高Lac-NCTD的脂溶性,将其通过逆向蒸发法制备脂质体,并利用羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMCT)与脂质体表面的静电吸附作用,制备Lac-NCTD磷脂复合物pH敏感型脂质体,以期其在弱酸性的肿瘤部位主动释药,增强Lac-NCTD的抗肿瘤活性。方法:(1)通过溶剂蒸发法合成Lac-NCTD磷脂复合物,以复合率为指标,考察反应溶剂、Lac-NCTD投药浓度、Lac-NCTD与磷脂投料比、反应温度、反应时间对复合率的影响,通过单因素和正交试验设计优化制备工艺,红外光谱分析(FT-IR)、差示扫描量热分析(DSC)和核磁共振分析(1H-NMR)表征磷脂复合物结构,测定磷脂复合物的表观油水分配系数,通过高效液相色谱(HPLC)考察磷脂复合物的性质。(2)分别以Lac-NCTD和Lac-NCTD磷脂复合物为原料药,分别采用逆向薄膜蒸发法蒸发法和逆向蒸发法制备脂质体,通过均匀设计优化脂质体制备工艺,考察脂质体包封率、载药量、粒径分布及Zeta电位。(3)通过CMCT与Lac-NCTD磷脂复合物脂质体表面的静电吸附作用,使CMCT包裹在脂质体表面,制得pH敏感型脂质体,并考察其与未包裹CMCT的脂质体在不同介质中的体外释放性质,与Lac-NCTD脂质体的释放特性进行比较。(4)通过MTT法考察Lac-NCTD、两种空白脂质体与两种载药脂质体对人体肝癌细胞HepG2的细胞毒作用。(5)采用HPLC法评价HepG2细胞对Lac-NCTD及其脂质体的摄取过程。(6)建立H22肝癌细胞小鼠荷瘤模型考察脂质体在体内抗肿瘤活性。(7)通过荧光染料Cy-7分子结构中的羧基与羧甲基壳聚糖中的伯胺发生反应,用Cy-7标记CMCT,制备Cy-7荧光标记的pH敏感型乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物脂质体,通过小动物活体成像仪,采集荧光信号,考察该脂质体在小鼠体内的靶向性。结果:(1) Lac-NCTD磷脂复合物的复合率为97.2±2.01%,其表观油水分配系数为Lac-NCTD的135倍,脂溶性显著改善。FT-IR、DSC及1H-NMR表征磷脂复合物结构得,磷脂复合物是由氢键缔合产生的复合物,其不同于药物与磷脂的普通物理混合物;HPLC检测结果显示Lac-NCTD磷脂复合物具有与Lac-NCTD相同的保留时间,表明磷脂复合物也不是一种全新化合物。(2)磷脂复合物脂质体的平均包封率为70.00±1.30%,载药量为2.24±0.43%,平均粒径为47.18±4.16nm,粒径跨距为0.70±0.07,Zeta电位为-26.0±2.97mV,电镜显示其形态圆整;Lac-NCTD脂质体包封率为38.12±1.12%,载药量为1.22±0.21%,平均粒径为83.14±9.64nm,粒径跨距为0.63±0.07,Zeta电位为-11.0±2.42mV。(3) Lac-NCTD脂质体体外释药符合Higuchi方程;pH敏感型脂质体体外释药符合Weibull方程,并且在pH5.9~7.4的介质中表现出显著的pH依赖性和爆破释放效应。(4)与Lac-NCTD、Lac-NCTD脂质体相比,pH敏感型脂质体在体外对肿瘤细胞HepG2的亲和性更好,细胞毒作用更显著。(5)体内抑瘤实验表明,pH敏感型脂质体可以更好地抑制H22肿瘤的生长,保护免疫器官。(6) pH敏感型脂质体可以靶向聚积在小鼠肝脏和肿瘤部位,有很好的靶向作用,从而减小药物毒副作用,提高抗肿瘤效果。结论:优化的药物磷脂复合物制备工艺简单易行,成本低,复合率高,可以显著提高药物脂溶性,从而提高其在脂质体中的包封率,羧甲基壳聚糖包裹的脂质体体外释药有显著的pH敏感性,可以在呈弱酸性的肿瘤部位主动释药,并对肝脏肿瘤部位具有靶向性,从而表现出更好的抗肿瘤作用。

全文目录


提要  4-6
Abstract  6-12
引言  12-20
  一、乳糖化-去甲斑蝥素的概述  12-13
  二、磷脂复合物对药物的影响  13-14
  三、脂质体对肿瘤的作用  14-15
  四、脂质体的研究进展  15-20
第一章 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的制备与表征  20-33
  材料  20
  方法与结果  20-32
    一、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的制备  20-23
      1. 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的制备工艺  20-21
      2. 单因素影响实验  21
        2.1 反应溶剂的选择  21
        2.2 乳糖化-去甲斑蝥素投药浓度的选择  21
        2.3 乳糖化-去甲斑蝥素与磷脂的投料比的选择  21
        2.4 反应温度的选择  21
        2.5 反应时间的选择  21
      3. 正交试验设计  21-23
      4. 最佳处方验证实验  23
    二、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物结构的表征  23-28
      1. 红外(FT-IR)图谱  23-24
      2. 差示扫描量热（DSC）图谱  24-25
      3. 核磁共振(1HNMR)图谱  25-28
    三、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的性质分析  28-31
      1. 高效液相色谱法（HPLC）分析  28-30
      2. 磷脂复合物表观油水分配系数的测定  30-31
        2.1 色谱条件  30
        2.2 标准曲线的制备  30
        2.3 样品测定  30-31
    四、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的放大反应  31-32
  讨论与小结  32-33
第二章 脂质体的制备与工艺优化  33-47
  材料  33-34
  方法与结果  34-45
    一、脂质体中乳糖化-去甲斑蝥素的含量测定  34-35
      1. 色谱条件  34
      2. 标准曲线  34
      3. 加样回收率与精密度  34
      4. 超滤加样回收率回收率  34-35
    二、乳糖化-去甲斑蝥素脂质体的制备  35-38
      1. 均匀设计优化脂质体制备工艺  35-36
        1.1 试验设计方案  35-36
        1.2 综合评分  36
      2. 最佳处方验证试验  36-37
      3. 乳糖化-去甲斑蝥素脂质体的质量考察  37-38
        3.1 包封率和载药量  37
        3.2 粒径分布和多分散指数  37-38
        3.3 Zeta 电位  38
    三、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物pH 敏感型脂质体的制备  38-41
      1. 均匀设计优化磷脂复合物脂质体制备工艺  38-39
        1.1 试验设计方案  38
        1.2 综合评分  38-39
      2. 最佳处方验证试验  39-40
      3. 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物pH 敏感型脂质体制备工艺  40
      4. 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物pH 敏感型脂质体的质量考察  40-41
        4.1 形态观察  40
        4.2 包封率和载药量  40-41
        4.3 粒径分布和多分散指数  41
        4.4 Zeta电位  41
    四、脂质体的体外释放特性  41-45
      1. 乳糖化-去甲斑蝥素脂质体的体外释放  41-43
      2. 磷脂复合物脂质体及其pH 敏感型脂质体的体外释放  43-45
  讨论与小结  45-47
第三章 脂质体的体外抗肿瘤活性  47-53
  材料  47-48
  方法与结果  48-51
    一、脂质体对肝肿瘤细胞的毒性  48-49
      1. 乳糖化-去甲斑蝥素及其脂质体对HepG2 细胞的半数抑制率IC50  48-49
    二、肝肿瘤细胞对脂质体的摄入  49-51
      1. 色谱条件  49-50
      2. 线性范围  50
      3. 回收率和精密度  50
      4.HepG2 细胞对Lac-NCTD 及其脂质体的摄入  50-51
  讨论与小结  51-53
第四章 脂质体在小鼠体内的抗肿瘤活性  53-60
  材料  53-54
  方法与结果  54-59
    一、荷瘤小鼠模型的建立  54
    二、脂质体在荷瘤小鼠体内的抗肿瘤活性  54-57
      1. 脂质体对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用  54-55
      2. 脂质体的抑瘤率  55-56
      3. 脂质体对荷瘤小鼠免疫器官的影响  56-57
    三、小鼠肿瘤的病理组织学观察  57-59
  讨论与小结  59-60
第五章 脂质体在小鼠体内的实时近红外荧光成像  60-64
  材料  60-61
  方法与结果  61-63
    一、Cy-7 荧光标记脂质体的制备  61
      1.C y-7 荧光标记羧甲基壳聚糖的制备  61
      2. Cy-7 荧光标记 Lac-NCTD 磷脂复合物 pH 敏感型脂质体的制备  61
    二、H22 荷瘤裸鼠模型的建立  61
    三、Cy-7 荧光标记脂质体在小鼠体内的近红外荧光成像  61-63
  讨论与小结  63-64
全文总结  64-65
参考文献  65-71
攻读学位期间发表的论文  71-72
致谢  72-73

相似论文

  1. 壳聚糖基温敏性复合水凝胶的制备及性能研究,R943
  2. 新型糖脂及糖脂/磷脂混合膜的界面性质研究,TB383.2
  3. 胆固醇对脂质体双分子层膜结构、性质及功能的影响,TB383.2
  4. 用于防龋DNA疫苗粘膜传递的有效载体的研究,R392.1
  5. 9-硝基喜树碱脂质体对胆管癌TFK-1细胞周期和凋亡的影响,R735.8
  6. 奥沙利铂长循环纳米脂质体药物制备的方法学比较及生物学特性研究,R96
  7. 甲氨蝶呤柔性纳米脂质体凝胶的构建及其治疗湿疹的临床疗效观察,R94
  8. 重症监护病房新生儿深部真菌感染临床特点及相关危险因素分析,R722.1
  9. 抗日本血吸虫SIEA26-28KU-scFv-吡喹酮长循环免疫脂质体的制备,R392
  10. 仿生细胞膜技术研究中药活性成分,R284
  11. 注射用羟基喜树碱脂质体的研究,R944
  12. 克拉霉素亚微乳注射液的研究,R94
  13. 脂质体槲皮素诱导食管癌细胞逆转化及可能机制的研究,R735.1
  14. 大豆皂甙Bb和纳米脂质体槲皮素对人食管癌细胞的凋亡影响,R735.1
  15. 脂联素在L-02细胞中对肝糖代谢信号转导机制的研究,R363
  16. 冬凌草甲素胆盐/磷脂混合纳米胶束的制备及其性质研究,R283
  17. 牛朊蛋白基因PrP102-242和PrP1-264在COS-7细胞中的表达,S852.659.7
  18. 联吡啶钌脂质体的合成及其在电化学发光免疫分析中的应用,R392.1
  19. pH敏感性聚（2-（丙烯酰氧基）丙酸）水凝胶的合成及其性能研究,O648.17
  20. 2-甲氧基雌二醇脂质体冻干粉大鼠组织分布的研究,R96

中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药剂学 > 制剂学
© 2012 www.xueweilunwen.com