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首乌藤黄酮的提取、分离纯化及生物活性研究

作　者: 史俊燕
导　师: 段玉峰
学　校: 陕西师范大学
专　业: 食品科学
关键词: 首乌藤黄酮类化合物抗氧化作用抑菌作用
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

首乌藤是何首乌的地上藤茎部分,它是我国的一味传统中药。本文以市售首乌藤药材为原料,采用响应曲面法优化了超声波辅助提取首乌藤黄酮的工艺；对首乌藤黄酮粗提物的乙酸乙酯萃取物,采用硅胶柱层析进行分离纯化研究；采用比色法研究了首乌藤黄酮粗提物及其各级萃取物的体外抗氧化能力以及首乌藤黄酮的抗菌效果。为首乌藤的进一步广泛开发利用提供了理论依据。主要成果包括以下几个方面：1.本文确定乙醇为最佳提取溶剂；选择影响首乌藤黄酮超声提取的三个关键因素,即超声强度、超声时间、乙醇浓度进行研究,在单因素实验基础之上,建立了首乌藤黄酮超声得率与以上三个因素的二次多项式回归模型,该模型拟合度好。最终得出的优化条件为：超声强度180w；超声时间40min；乙醇浓度52%；此条件下的得率为3.19%。2.首乌藤黄酮粗提物用不同的有机溶剂萃取分组,对乙酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱进行分离和纯化,得到4个组分,用高效液相色谱和颜色反应对这4个组分进行了定性和定量研究,结果显示其中一个物质可能是单一物质,并且这种物质可能是黄酮或黄酮醇类物质。3.研究了首乌藤黄酮粗提物及其不同极性黄酮组分的体外抗氧化性,实验结果表明,在清除DPPH自由基体系中,清除率的大小顺序是Vc>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物>粗提物≈氯仿萃取物>水相残留物；还原能力的大小顺序是Vc>乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>氯仿萃取物>粗提物>水相残留物；对羟基自由基清除率的大小顺序是Vc>乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>氯仿萃取物>水相残留物>粗提物；对超氧阴离子自由基清除率的大小顺序是Vc>乙酸乙酯萃取物>水相残留物>氯仿萃取物≈正丁醇萃取物,且粗提物的浓度越大,清除效果越好；首乌藤黄酮粗提物对油脂氧化具有一定的抑制作用,但是弱于BHT和VE。4.首乌藤黄酮粗提物的抑菌活性实验结果显示,对金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒杆菌、李斯特杆菌的最小抑菌浓度分别为6.25%、12.5%、12.5%、3.125%；对枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、大肠杆菌的抑菌作用则很不明显。pH和紫外光对首乌藤黄酮的抑菌性均有一定程度的影响。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-10
第1章文献综述  10-32
  1.1 首乌藤的研究概况  10-14
    1.1.1 首乌藤资源概况  10
    1.1.2 首乌藤的鉴别  10
    1.1.3 首乌藤的化学成分研究  10-12
    1.1.4 首乌藤药理作用及临床应用  12-14
  1.2 自由基  14-16
    1.2.1 自由基  14
    1.2.2 自由基与人体健康  14-15
    1.2.3 体外抗氧化活性的检测  15-16
    1.2.4 人体与自由基  16
    1.2.5 黄酮类化合物的抗氧化性  16
  1.3 黄酮类化合物  16-30
    1.3.1 黄酮类化合物的基本结构和分类  16-17
    1.3.2 黄酮类化合物的性质  17-19
    1.3.3 黄酮类化合物的提取方法  19-22
    1.3.4 黄酮类化合物的分离  22-25
    1.3.5 黄酮类化合物的分析  25-27
    1.3.6 黄酮类化合物的结构表征  27-28
    1.3.7 黄酮类化合物的药学研究  28-29
    1.3.8 黄酮类化合物的应用  29-30
  1.4 立题背景和研究内容  30-32
第2章响应曲面法优化超声波辅助提取首乌藤黄酮的工艺  32-42
  2.1 材料与仪器  32
    2.1.1 材料  32
    2.1.2 药品试剂  32
    2.1.3 主要仪器  32
  2.2 试验内容与方法  32-34
    2.2.1 首乌藤原料预处理  32
    2.2.2 首乌藤总黄酮的测定方法  32-33
    2.2.3 溶剂种类的筛选  33
    2.2.4 超声波辅助提取首乌藤总黄酮的工艺研究  33
    2.2.5 响应曲面法(RSM)优化超声波辅助提取首乌藤总黄酮的工艺  33-34
  2.3 结果和分析  34-40
    2.3.1 芦丁标准曲线的绘制  34-35
    2.3.2 溶剂种类的筛选  35-36
    2.3.3 单因素试验结果  36-37
    2.3.4 超声波辅助提取首乌藤总黄酮的工艺参数优化  37-38
    2.3.5 超声波辅助提取首乌藤总黄酮的响应面分析和优化  38-40
  2.4 本章小结  40-42
第3章首乌藤黄酮的分离及鉴定  42-46
  3.1 材料与仪器  42
    3.1.1 材料  42
    3.1.2 药品试剂  42
    3.1.3 主要仪器  42
  3.2 试验内容与方法  42-43
    3.2.1 有机溶剂萃取分离首乌藤黄酮的研究  42-43
    3.2.2 硅胶柱层析分离首乌藤黄酮乙酸乙酯萃取物的研究  43
    3.2.3 分离物的高效液相色谱鉴定及颜色反应  43
  3.3 结果与分析  43-45
    3.3.1 有机溶剂萃取分离首乌藤黄酮试验结果  43-44
    3.3.2 硅胶柱层析分离物的高效液相色谱图及颜色反应  44-45
  3.4 本章小节  45-46
第4章首乌藤黄酮粗提物及其不同极性黄酮组分的抗氧化活性比较  46-54
  4.1 材料与仪器  46
    4.1.1 材料  46
    4.1.2 药品试剂  46
    4.1.3 主要仪器  46
  4.2 试验方法  46-48
    4.2.1 首乌藤黄酮粗提物及其不同极性黄酮组分的制备  46-47
    4.2.2 首乌藤不同黄酮类组分清除DPPH自由基的能力  47
    4.2.3 首乌藤不同黄酮类组分总还原力的测定  47
    4.2.4 首乌藤不同黄酮类组分清除羟基自由基的能力  47
    4.2.5 首乌藤不同黄酮类组分清除超氧阴离子自由基的能力  47-48
    4.2.6 首乌藤黄酮粗提物的油脂抗氧化试验  48
    4.2.7 半清除率(IC~_(50))的测定  48
  4.3 结果与分析  48-53
    4.3.1 首乌藤不同黄酮类组分清除DPPH自由基的能力  48
    4.3.2 首乌藤不同黄酮类组分总还原力的测定  48-50
    4.3.3 首乌藤不同黄酮类组分清除羟基自由基的能力  50
    4.3.4 首乌藤不同黄酮类组分清除超氧阴离子自由基的能力  50-52
    4.3.5 首乌藤黄酮粗提物油脂抗氧化作用的测定  52-53
  4.4 本章小结  53-54
第5章首乌藤黄酮的抗菌试验研究  54-60
  5.1 材料与仪器  54
    5.1.1 材料  54
    5.1.2 菌种  54
    5.1.3 试剂  54
    5.1.4 培养基  54
    5.1.5 主要仪器  54
  5.2 试验方法  54-56
    5.2.1 培养基制备  55
    5.2.2 菌种活化  55
    5.2.3 菌悬液的配置  55
    5.2.4 打孔法测定首乌藤黄酮粗提物的抑菌作用  55
    5.2.5 首乌藤黄酮粗提物的最小抑菌浓度(MIC)  55
    5.2.6 不同处理条件下首乌藤黄酮粗提物的抑菌效果  55-56
  5.3 结果  56-58
    5.3.1 首乌藤黄酮粗提物的抑菌效果  56-58
    5.3.2 PH、紫外光处理对首乌藤黄酮粗提物抑菌活性的影响  58
  5.4 本章小结  58-60
第6章结论及创新点  60-62
  6.1 结论  60-61
  6.2 创新点  61-62
参考文献  62-66
致谢  66-68
攻读硕士学位期间研究成果  68-69

首乌藤黄酮的提取、分离纯化及生物活性研究

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