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首乌藤黄酮的提取分离及生物活性研究

作　者: 肖扬
导　师: 段玉峰
学　校: 陕西师范大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 首乌藤 黄酮类化合物 提取分离 生物活性
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


首乌藤,为卫生部公布的药食同源中药品种之一,是何首乌的藤茎或带叶藤茎。对它的研究主要集中在种植、鉴别及临床应用方面,而对其化学成分尤其是黄酮类化合物的研究较少。本试验以市售经生药学鉴定的首乌藤为原料,对黄酮的提取工艺、分离纯化及生物活性进行了研究,结果如下(1)通过对比不同溶剂对于首乌藤黄酮的提取效果,确定乙醇为提取溶剂；(2)有机溶剂提取试验结果表明,各因素对首乌藤总黄酮得率的影响依次为：提取时间>乙醇浓度>提取温度>料液比。最佳工艺条件为：提取时间2.5h,乙醇浓度50%,提取温度70℃,料液比1：20。在此最佳工艺条件下提取2次,首乌藤总黄酮的得率是8.93%；(3)超声辅助提取试验结果表明,各因素对首乌藤总黄酮得率的影响依次为：超声功率>乙醇浓度>提取温度>提取时间。最佳工艺条件为：超声功率200W,乙醇浓度60%,提取温度50℃,提取时间40min。在此最佳工艺条件下提取2次,首乌藤总黄酮的得率是12.79%；超声波辅助法提取与常规法提取相比,总黄酮得率提高了43.23%；(4)超声辅助提取后所得到首乌藤黄酮粗品,经三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后,可得到不同的溶剂萃取物,其中正丁醇萃取物最多,其次为乙酸乙酯萃取物；(5)通过对10种树脂的静态吸附试验,确定了大孔树脂LS300B对首乌藤黄酮正丁醇萃取物具有较好的吸附和解吸性能,是一种理想的吸附剂,适宜于对首乌藤黄酮的分离；(6)对首乌藤黄酮正丁醇萃取物分别通过LS300B大孔吸附树脂柱色谱、聚酰胺柱色谱及硅胶柱色谱进行了纯化分离,得到了3个黄酮类组分,并通过聚酰胺薄层色谱及颜色反应进行鉴定,证明其30%乙醇洗脱细可能是双氢黄酮类物质：其50%乙醇洗脱组分及70%乙醇洗脱组分经聚酰胺柱色谱及硅胶柱色谱分离,经薄层色谱鉴定仍是混合物,需要进一步分离纯化；(7)通过非油体系体外活性试验得山,超声提取得到的首乌藤黄酮及相应的萃取物,在同浓度条件下与BHT比较,都具有较为明显的体外抗氧化活性。其中,还原能力的大小顺序为：水相残留物>超声提取物>正丁醇萃取物>BHT>乙酸乙酯萃取物；对·OH自由基、O2-·自由基及DPPH·自由基的清除作用最强的是首乌藤黄酮水相残留物,且对·OH自由基的清除能力高于BHT；(8)比较空白对照组,低、中、高剂量饲喂组小鼠的体重和各器官的重量,经过饲喂黄酮正丁醇萃取物的小鼠的各器官重量无显著的变化；(9)比较空白对照组,低、中、高剂量饲喂组可以看出,首乌藤黄酮正丁醇萃取物可以有效地降低血清、肝组织、脑组织中MDA的含量,特别是中、高剂量组达到了极显著水平；血清、肝组织、脑组织中的GSH-Px的活力和SOD活力都比空白对照组有提高,中、高剂量组几乎全部与空白组相比有极显著差异。中、高组血清、肝组织中CAT活力与空白组相比有显著差异。证明首乌藤黄酮是一种良好的抗氧化功能性化合物。研究表明,黄酮类化合物在首乌藤中不仅有较高的含量,而且有较高的生物活性,因此首乌藤具有良好的药用、食用价值,是一种极具开发前景的植物资源。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-12
第一章 引言  12-32
  1 首乌藤资源及利用概况  12-15
    1.1 本草沿革  12-13
    1.2 首乌藤营养成分  13
    1.3 药用化学成分  13-14
    1.4 理化分析  14-15
    1.5 药理作用  15
    1.6 临床应用  15
  2 黄酮类化合物的综述  15-30
    2.1 概述  15-16
    2.2 黄酮类化合物的性质  16-17
    2.3 黄酮类化合物的提取方法  17-20
      2.3.1 传统的提取分离方法  17
      2.3.2 高新技术提取分离方法  17-20
    2.4 黄酮类化合物的纯化  20-23
      2.4.1 双水相萃取法  20-21
      2.4.2 柱层析法  21-23
    2.5 黄酮类化合物的分析方法  23-26
      2.5.1 分光光度法  23
      2.5.2 高效液相色谱法  23-24
      2.5.3 平面色谱法  24-25
      2.5.4 极谱法  25
      2.5.5 气相色谱法  25
      2.5.6 液相色谱与质谱联用法  25-26
      2.5.7 毛细管电泳法  26
    2.6 黄酮类化合物的药理活性  26-30
      2.6.1 抗氧化活性  26-27
      2.6.2 抗炎免疫作用  27
      2.6.3 对心血管系统的作用  27-28
      2.6.4 利胆及肝脏保护作用  28-29
      2.6.5 抗肿瘤、抗癌作用  29
      2.6.6 对脑血管疾病的作用  29
      2.6.7 延缓衰老作用  29
      2.6.8 对免疫方面的作用  29
      2.6.9 对骨伤方面的作用  29-30
      2.6.10 抗菌作用  30
  3 立题意义和主要研究内容  30-32
    3.1 立题意义  30
    3.2 研究内容  30-32
第二章 首乌藤黄酮类化合物的提取工艺研究  32-46
  1 试验材料、试剂及仪器  32
    1.1 试验材料  32
    1.2 试验试剂  32
    1.3 主要仪器  32
  2 试验内容与方法  32-36
    2.1 首乌藤原料预处理  32
    2.2 首乌藤总黄酮的测定方法  32-33
      2.2.1 标准曲线的绘制方法  33
      2.2.2 样品中黄酮含量的测定  33
    2.3 溶剂种类的筛选  33
    2.4 有机溶剂提取首乌藤总黄酮的工艺研究  33-34
      2.4.1 乙醇浓度对得率的影响  33-34
      2.4.2 料液比对得率的影响  34
      2.4.3 提取时间对得率的影响  34
      2.4.4 提取温度对得率的影响  34
      2.4.5 有机溶剂提取工艺的正交优化试验  34
      2.4.6 提取次数对得率的影响  34
    2.5 超声辅助提取首乌藤总黄酮的工艺研究  34-36
      2.5.1 乙醇浓度对黄酮得率的影响  35
      2.5.2 超声提取时间对黄酮得率的影响  35
      2.5.3 超声提取温度对黄酮得率的影响  35
      2.5.4 超声波功率对黄酮得率的影响  35
      2.5.5 超声提取工艺的正交优化试验  35
      2.5.6 提取次数对得率的影响  35-36
  3 结果与分析  36-45
    3.1 芦丁标准曲线的绘制  36
    3.2 溶剂种类的筛选  36-37
    3.3 有机溶剂提取首乌藤总黄酮的工艺研究结果  37-41
      3.3.1 乙醇浓度对得率的影响  37
      3.3.2 料液比对得率的影响  37-38
      3.3.3 提取时间对得率的影响  38-39
      3.3.4 提取温度对得率的影响  39
      3.3.5 有机溶剂提取的正交试验结果分析  39-40
      3.3.6 提取次数对得率的影响  40-41
    3.4 超声提取首乌藤总黄酮的工艺研究结果  41-45
      3.4.1 乙醇浓度对黄酮得率的影响  41-42
      3.4.2 超声提取时间对黄酮得率的影响  42
      3.4.3 超声提取温度对黄酮得率的影响  42-43
      3.4.4 超声波功率对黄酮得率的影响  43-44
      3.4.5 超声提取工艺的正交优化试验结果与分析  44
      3.4.6 提取次数对得率的影响  44-45
  4 本章小结  45-46
第三章 首乌藤黄酮类化合物的分离及鉴定  46-54
  1 试验材料、试剂及仪器  46
    1.1 试验材料  46
    1.2 试验试剂  46
    1.3 主要仪器  46
  2 试验内容与方法  46-49
    2.1 有机溶剂萃取分离首乌藤黄酮的研究  46-47
    2.2 大孔吸附树脂分离首乌藤黄酮萃取物的研究  47-49
      2.2.1 树脂的预处理  47
      2.2.2 吸附树脂的物理性能  47
      2.2.3 首乌藤黄酮的测定方法  47-48
      2.2.4 大孔吸附树脂对首乌藤黄酮萃取物的静态吸附试验  48
      2.2.5 大孔吸附树脂对首乌藤黄酮萃取物的动态吸附试验  48-49
    2.3 混合梯度洗脱首乌藤黄酮萃取物  49
  3 结果与分析  49-53
    3.1 有机溶剂萃取分离首乌藤黄酮试验结果  49
    3.2 大孔树脂对首乌藤黄酮正丁醇萃取物静态吸附试验结果  49-51
    3.3 LS300B对首乌藤黄酮正丁醇萃取物的动态吸附试验结果  51-52
      3.3.1 洗脱剂流速的影响  51
      3.3.2 pH值的影响  51-52
      3.3.3 上样液浓度的影响  52
    3.4 混合梯度洗脱首乌藤黄酮正丁醇萃取物研究结果  52-53
  4 本章小节  53-54
第四章 首乌藤黄酮类化合物的生物活性研究  54-67
  1 试验材料、试剂及仪器  54-55
    1.1 试验材料  54
    1.2 试验试剂  54
    1.3 主要仪器  54-55
  2 试验内容与方法  55-59
    2.1 体外活性的测定  55-56
      2.1.1 还原力的测定  55
      2.1.2 对·OH自由基清除作用的测定  55
      2.1.3 对超氧阴离子(O_2~-·)清除率的测定  55-56
      2.1.4 对DPPH·自由基清除率的测定  56
    2.2 体内活性的测定  56-59
      2.2.1 动物的分组及饲喂  56
      2.2.2 血清及组织匀浆的制备  56-57
      2.2.3 蛋白含量的测定  57
      2.2.4 谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活力的测定  57
      2.2.5 超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定  57-58
      2.2.6 丙二醛(MDA)含量的测定  58
      2.2.7 过氧化氢酶(CAT)活力的测定  58-59
  3 结果与分析  59-66
    3.1 体外活性试验  59-62
      3.1.1 总还原力的测定  59-60
      3.1.2 对·OH自由基清除作用的测定  60
      3.1.3 对超氧阴离子(O_2~-·)清除作用的测定  60-61
      3.1.4 对DPPH·自由基清除率的测定  61-62
    3.2 体内活性试验  62-66
      3.2.1 小鼠的体重变化  62-63
      3.2.2 小鼠器官的变化  63
      3.2.3 小鼠体内谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活力的变化  63-64
      3.2.4 小鼠体内超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化  64-65
      3.2.5 小鼠体内丙二醛(MDA)含量的变化  65
      3.2.6 小鼠体内过氧化氢酶(CAT)活力的变化  65-66
  4 本章小结  66-67
第五章 结论  67-69
  1 论文主要结论  67-68
  2 创新之处  68-69
参考文献  69-77
致谢  77

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 中草药制剂的生产
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