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木芙蓉叶总黄酮的提取纯化及其药效学的研究

作　者: 孙运峰
导　师: 周长征
学　校: 山东中医药大学
专　业: 药剂学
关键词: 木芙蓉叶黄酮类化合物提取纯化抑菌抗病毒
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究木芙蓉叶总黄酮的提取、纯化及含量测定,初步探讨木芙蓉叶总黄酮的抑菌活性及不同极性溶剂提取物的体外抗病毒活性。方法:以总黄酮的提取率为指标,采用单因素试验和正交试验,对木芙蓉叶总黄酮的提取工艺方法进行优化,确定其最佳提取条件。采用聚酰胺树脂对木芙蓉叶总黄酮提取液进行纯化,以吸光度和比吸附量为指标,进行单因素试验研究,得到了最优的纯化方法。采用HPLC色谱法检测木芙蓉叶总黄酮提取物,比较了乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%冰醋酸(1:1:19.4:78.6)、0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(含1%冰醋酸)-甲醇(73:27)、甲醇与水梯度洗脱、乙腈与0.2%磷酸梯度洗脱效果。运用药敏纸片法和二倍稀释法,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、藤黄微球菌、普通变形菌、粪肠球菌为供试菌种,对木芙蓉叶提取物进行抑菌试验。以呼吸道合胞病毒为供试病毒,不同极性溶剂的提取物进行体外抗病毒实验进行研究。结果:木芙蓉叶总黄酮最佳提取条件为:乙醇浓度50%,料液比1:10,提取1.5 h,浸提3次。此工艺所得到的提取物中,总黄酮的提取率为22.81 mg/g。采用聚酰胺树脂对木芙蓉叶总黄酮提取液进行纯化,以吸光度和比吸附量为指标,进行单因素试验研究,得到了最优的纯化方法:上样浓度2.25 mg/mL,上样量10 mL/g,乙醇解吸浓度70%,解吸速率2 BV/h,洗脱用量为2.5 BV。用聚酰胺纯化后总黄酮的质量分数提高了45%,达到60%。采用HPLC法,以乙腈与0.2%磷酸梯度洗脱效果最好,经检测木芙蓉总黄酮提取物中金丝桃苷含量为纯化物总量的9.57%,芦丁为1.52%。木芙蓉叶提取物对大肠杆菌、藤黄微球菌、粪肠球菌、普通变形杆菌最低抑菌浓度(MIC)均为0.125 mg/mL,对藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌(MIC)均为0.25 mg/mL。结果表明提取物对上述6种抑菌效果均较好。木芙蓉叶总黄酮的水提取物及水煎样对呼吸道合胞病毒具有一定的抑制作用,水提取物的EC50为1:8.94,TI>8.94,水煎样的EC50为1:9.00,TI>9.00。结论:通过对提取、纯化工艺优化得到纯度较高的木芙蓉叶总黄酮提取物,采用HPLC法,以乙腈与0.2%磷酸梯度洗脱测定木芙蓉叶提取物中芦丁、金丝桃苷,灵敏度高,重复性好,为木芙蓉叶总黄酮检测提供了依据,并初步制定了木芙蓉叶总黄酮提取物的指纹图谱。并且其具有较好的抑菌活性,可用于天然抑菌剂的开发,但其体外抗病毒的效果并不显著。木芙蓉的水提取物及水煎样有一定的抑制呼吸道合胞病毒的作用,而其他提取物均无体外抑制作用。

木芙蓉叶总黄酮的提取纯化及其药效学的研究

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