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LSECtin正调控LPS诱导的TLR4信号通路及其免疫效应

作　者: 路彦涛
导　师: 贺福初; 唐丽
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 先天免疫 交谈 LSECtin TLR4
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


从低等生物开始,C型凝集素受体(CLRs)作为一类重要的模式识别受体(PRRs)就一直发挥着识别病原体、抵抗感染的作用。有的C型凝集素可直接诱导胞内信号传导,激活NF-κB通路,导致炎症细胞因子的产生。值得关注的是还有很多C型凝集素通过多种途径协同或拮抗Toll样受体(TLRs)信号,诱导免疫反应抵抗微生物感染;或干扰TLRs信号转导,导致微生物免疫逃逸。肝窦内皮细胞C型凝集素分子LSECtin是本实验室刘万里博士等人在国际上率先克隆并研究的一种新型凝集素分子。与已知的凝集素分子DC-SIGN、DC-SIGNR和CD23属于同一家族,共属于C型凝集素超家族。该家族成员DC-SIGN作为病原微生物识别受体,通过直接诱导胞内信号或通过调控TLRs胞内信号,在微生物感染与免疫方面发挥重要的功能。我们推测LSECtin作为一种新的CLRs,很可能在机体先天免疫反应中扮演重要角色。本文中我们揭示:(1)LSECtin是一种新的细菌识别分子:通过细菌粘附实验,我们证实LSECtin可以与大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏杆菌结合,并且可以被Ca2+的螯合剂EGTA所抑制。由于大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏杆菌都是革兰氏阴性菌,革兰氏阴性菌的主要成分都是脂多糖(LPS),因此我们推测LSECtin可能与脂多糖LPS存在相互作用,并在LPS介导的信号通路及其免疫反应中发挥功能。(2)LSECtin表达于巨噬细胞:通过PCR检测,证实LSECtin表达于小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞和骨髓来源的小鼠原代巨噬细胞(BMMφ);在LPS刺激的条件下,LSECtin的表达上调。(3)LSECtin正调控LPS诱导的TLR4信号通路及其免疫效应:在整体水平上,在LPS诱导的小鼠休克模型中,与WT小鼠相比,LSECtin-/-小鼠体内炎症细胞因子分泌明显减少、肺脏的损伤明显减轻、小鼠死亡率明显下降。在细胞水平上,敲低RAW264.7内LSECtin的表达后,LPS诱导的RAW264.7细胞分泌炎症细胞因子明显下降;敲除BMMφ内的LSECtin,LPS诱导的BMMφ分泌炎症细胞因子分泌也明显下降。在分子水平上,在LPS刺激的条件下,敲低LSECtin导致RAW264.7内的IκB的降解减慢以及p38和JNK1/2的磷酸化水平下降;敲除LSECtin导致BMMφ内的IκB的降解减慢以及p38和JNK1/2的磷酸化水平下降;相反,过表达LSECtin导致IκB降解加快以及p38和JNK1/2的磷酸化水平增强。(4)LSECtin促进TLR4在巨噬细胞表面的定位,上调其接头分子MyD88的募集,从而调控NF-κB信号通路及其免疫效应分子的产生:我们通过免疫共沉淀实验证明了LSECtin通过其CRD功能结构域与TLR4、CD14和MD-2发生相互作用。进而我们证实在LPS刺激的条件下,与WT BMMφ相比,LSECtin-/-BMMφ表达的TLR4的比例以及平均荧光强度均明显下降,表明LSECtin促进TLR4在BMMφ表面的定位。在LPS刺激的条件下,敲低LSECtin导致RAW264.7内MyD88的表达下降,敲除LSECtin导致BMMφ内MyD88的表达下降;相反,过表达LSECtin上调MyD88的表达。因此,LSECtin促进了MyD88接头分子的募集。(5) LSECtin可能以膜形式而非可溶形式发挥功能:我们有趣的发现在LSECtin敲除的BMMφ中加入可溶性LSECtin蛋白不能挽救因LSECtin缺失导致的细胞因子分泌减少;LSECtin可溶性蛋白也不能逆转LSECtin缺失导致的小鼠休克死亡率下降。因此可推测LSECtin自身必须锚定在膜上,才能促进TLR4的定位。综上所述,本文揭示LSECtin作为一种C型凝集素分子,可正调控LPS诱导的TLR4信号通路及其免疫效应。

全文目录


英文缩略词  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-9
第1章 前言  9-13
第2章 LSECtin结合细菌的筛选  13-17
  1.材料和方法  13-14
  2.结果与分析  14-16
  本章小结  16-17
第3章 LSECtin在巨噬细胞上的表达  17-23
  1.材料和方法  17-20
  2.结果与分析  20-21
  本章小结  21-23
第4章 LSECtin正调控LPS诱导的TLR4信号通路及其免疫效应  23-39
  第一节 LSECtin促进LPS诱导的小鼠休克的发生  23-27
  第二节 LSECtin促进LPS诱导的巨噬细胞免疫反应  27-32
  第三节 LSECtin促进LPS诱导的NF-κB信号通路  32-39
第5章 LSECtin正调控LPS诱导的TLR4信号通路机制的探讨  39-50
  第一节 LSECtin与TLR4以及TLR4辅助分子相互作用的验证  39-43
  第二节 LSECtin促进BMMφ细胞上TLR4的表达  43-45
  第三节 LSECtin促进TLR4下游接头蛋白MyD88的募集  45-47
  第四节 LSECtin可能以膜形式参与LPS诱导的免疫反应  47-50
本章小结  50-51
总结和展望  51-53
参考文献  53-63
附录  63-83
在读期间发表或投稿的论文  83-85
个人简历  85-87
致谢  87

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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