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雷公藤甲素对脂多糖大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制研究

作　者: 高建瓴
导　师: 詹英
学　校: 苏州大学
专　业: 麻醉学
关键词: 急性肺损伤(ALI) 脂多糖(LPS) 雷公藤甲素 Toll样受体4(TLR4) 核因子-κB(NF-κB)
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的建立和评估脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱导的大鼠急性肺损伤动物模型方法30只雄性SD大鼠,体重200~250g,随机分为2组:对照组(C组,n=15);模型组(M组,n=15)。C组和M组分别经尾静脉注射同等容量的生理盐水或LPS 5mg/kg。各组分别于建模前1h和建模后3、6、12h抽取动脉血气,及建模后12h处死大鼠,心脏采血,4℃生理盐水灌洗左肺,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),用ELISA法检测血清和BALF中TNF-α水平;并留取右肺下叶,石蜡切片,HE染色,光镜下观察肺组织病理改变;计算大鼠右肺中叶湿/干重(W/D)比。结果HE染色后,M组大鼠光镜下可见肺泡正常结构消失,间质水肿增宽,大量炎性细胞浸润,毛细血管明显扩张、充血,白细胞附壁。与C组相比,M组肺毛细血管充血、中性粒细胞渗出及肺泡间隔增宽程度明显加剧(P<0.05),且M组右肺中叶W/D比值明显增加(P<0.05)。在动脉血氧分压(PaO2)变化上,M组PaO2随时间延长下降明显。与C组同时间段相比,M组建模后3、6、12h PaO2均下降明显(P<0.05);与同组基础值相比,M组建模后12h PaO2下降46.01%。此外,与C组相比,M组血清、BALF中TNF-α水平明显升高(P<0.05)。M组大鼠肺部病理改变,PaO2下降及炎症因子分泌的增加符合急性肺损伤动物模型标准。结论以LPS 5mg/kg尾静脉注射可成功建立大鼠急性肺损伤模型。目的观察雷公藤甲素(triptolide,TP)对LPS大鼠急性肺损伤的保护作用及其对Toll样受体-4(Toll like receptor-4, TLR4)转导通路的影响,探讨其肺保护作用的可能机制。方法1、雷公藤甲素对LPS诱导大鼠急性肺损伤的保护作用根据预实验结果,给予LPS 10mg/kg,来研究雷公藤甲素的肺保护作用。40只雄性SD大鼠,体重200~250g,随机分为4组:①正常组(N组,n=5),不作任何处理;②对照组(C组,n=5),经尾静脉注射生理盐水,同时腹腔注射1%二甲基亚砜(DMSO);③LPS组(L组,n=15),经尾静脉注射LPS 10mg/kg,同时腹腔注射1% DMSO;④雷公藤甲素组(TP组,n=15),经尾静脉注射LPS 10mg/kg,同时腹腔注射雷公藤甲素(1%DMSO溶解)50μg/kg。除N组外,其余各组尾静脉注射同等容量的生理盐水或LPS 10mg/kg,腹腔注射同等容量的1% DMSO或TP 50μg/kg。于注射前1h和注射后3、6、12h、24h抽取动脉血气;观察24h后处死大鼠,用ELISA法检测血清和BALF中TNF-α水平;光镜下观察肺组织病理改变并评分;计算大鼠右肺中叶W/D;统计24小时大鼠死亡率。2、雷公藤甲素对TLR4受体转导通路的影响42只雄性SD大鼠,体重200~250g,随机分为6组:①正常组(N组,n=5),不作任何处理;②对照组(C组,n=5),经尾静脉注射生理盐水,同时腹腔注射1%DMSO;③LPS组(L组,n=8),经尾静脉注射LPS 5mg/kg,同时腹腔注射1%DMSO;④雷公藤甲素25μg组(TP1组,n=8),经尾静脉注射LPS 5mg/kg,同时腹腔注射雷公藤甲素25μg/kg;⑤雷公藤甲素50μg组(TP2组,n=8),经尾静脉注射LPS 5mg/kg,同时腹腔注射雷公藤甲素50μg/kg;⑥雷公藤甲素100μg组(TP3组,n=8),经尾静脉注射LPS 5mg/kg,同时腹腔注射雷公藤甲素100μg/kg。各组观察12 h后处死大鼠,取新鲜肺组织,心脏采血及收集BALF。用荧光定量PCR测定TLR4、NF-κB mRNA的表达;应用western blot分析TLR4蛋白表达;应用ELISA分析TNF-α表达。结果1、TP组24h死亡率明显低于L组(P<0.05),光镜下肺泡结构基本正常,间质有水肿,部分可见毛细血管扩张、充血和炎性细胞浸润,肺病理改变半定量分析优于L组(P<0.05),且右肺中叶W/D比值低于L组(P<0.05)。与L组相比, TP组6、12、24h PaO2较高(P<0.05),血清和BALF中TNF-α水平明显降低(P<0.05),但与N、C组相比,TP组3、6、12、24h PaO2均降低(P<0.05),且血清和BALF中TNF-α水平较高(P<0.05)。2、TP各组随着雷公藤甲素剂量的增加,TLR4、NF-κB mRNA和TLR4蛋白的表达呈现下降趋势,与L组比较,TP2、TP3组TLR4、NF-κB mRNA和TLR4蛋白水平明显降低(P<0.05);血清和BALF中TNF-α水平亦呈下降趋势,其中TP2、TP3组TNF-α水平低于L组(P<0.05)。结论1、雷公藤甲素对于LPS诱导的大鼠急性肺损伤具有一定保护作用。2、雷公藤甲素能抑制TLR4受体表达,抑制NF-κB活化,减少炎症因子的分泌。据此我们有理由推测对TLR4受体转导通路的调节可能是雷公藤甲素肺保护作用的机制之一。3、雷公藤甲素对TLR4受体转导通路的抑制在25～100μg/kg范围内呈现剂量依赖性。

全文目录


摘要  4-7
Abstract  7-11
前言  11-14
第一部分 LPS 诱导大鼠急性肺损伤动物模型的建立  14-25
  实验材料  14-15
  实验方法  15-18
  结果  18-22
  讨论  22-25
第二部分 雷公藤甲素对LPS 大鼠急性肺损伤保护作用  25-44
  实验材料  25-27
  实验方法  27-31
  结果  31-40
  讨论  40-44
结论  44-45
参考文献  45-50
综述一  50-60
  参考文献  57-60
综述二  60-68
  参考文献  65-68
中英文缩略词  68-69
攻读学位期间公开发表的论文  69-70
致谢  70-71

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