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猪链球菌7型的分型与抗性的研究及猪链球菌2型可能的毒力基因的发现

作　者: 田云
导　师: 陆承平；Frank M.Aarestrup
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪链球菌 核糖型 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 抑制性差减杂交(SSH) 可能的毒力基因 PCR检测
分类号: S852.61
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要


对猪链球菌7型菌株的特征——核糖型(ribotyping)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)型、耐药性及其所携带的抗性决定簇进行了研究。并采用抑制性差减杂交(SSH)的方法对2型毒力菌株所携带的差异基因序列进行了研究，发现了5个新的可能的毒力基因。并对这5个片段在2型菌株中的分布进行了研究。 1 对103株猪链球菌7型菌株的核糖型进行了研究。共发现了41种不同的核糖型，并且其中有18种在103株细菌中是重复出现的。其中以核糖型2为主，其占所有被分析菌株的23％(24/103)。根据77％的同源性，38种核糖型图式可以被划分为A及B两个主要的群落，3个独特的核糖型图式不能被划分于任何一个主要的群落，且菌株的核糖型图式与其的临床起源(如脑膜炎、肺炎)之间未发现很明显的关系。 2 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法，对54株7型猪链球菌(包括24株核糖型2分离株)进行了遗传多样性分析，共发现了50种PFGE型。可被划分为A和B两个群落，群落B可以被进一步划分为三个亚群(B1、B2和B3)。属于同一核糖型的不同菌株，可以通过PFGE进一步区分开来。经分析后发现，大多数的脑或脑膜分离株都属于B群，从脾中分离的所有菌株均归属于B1亚群，但是所有的肺分离株未显示PFGE特异性。结果表明，在菌株的临床起源(如脑膜炎、肺炎)与PFGE型之间无明显的联系。 3 测定了103株7型丹麦分离株对13种抗生素的耐药性。结果发现，40.78％(42/103)的细菌对红霉素具有抗性，而24.27％(25/103)及28.16％(29/103)的细菌分别对四环素和链霉素具有抗性。此外，大量的分离株(66株)表现为多重抗性。猪链球菌7型菌株对头孢噻呋、环丙沙星、氟苯尼考、青霉素、甲氧氨苄嘧啶及甲氧氨苄嘧啶+磺胺甲基异嗯唑敏感。此外，用PCR方法，对42株红霉素抗性菌株和29株四环素抗性菌株所携带的5种抗性决定簇进行了检测。发现erm(B)是7型菌株的主要的红霉素抗性决定簇，而 tetM）及tet （）是7型菌株的主要的四环素抗性决定簇。 4对有毒力的国内分离株HA9801株与无毒力的国外分离株12‘的核糖型进行了分型，二者分别属于Rasmussen等所报导的 1型及4型，且具有约 60％的同源性。与此同时，检测了这两株细菌对u种抗生素的耐药性，肌9801株具有链霉素、四环素和磺胺甲基异嗯哇抗性，而 12‘菌株则不具有任何抗性。对HA9801株的四环素抗性决定簇的研究表明，其携带有tet（M）抗性基因。 5对毒力株HA9801株及无毒力株12’进行了抑制性差减杂交（SSH）实验，获得了5个可能的毒力基因的片段，其功能分别是转录调节子，氨基酸通透酶，ABC转运子；表面锚定蛋白等。 6根据抑制性差减杂交（％回）所获得的5个可能的毒力基因的序列，设计了5对引物，对它们在2型菌株中的分布进行了研究。

全文目录


中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
文献综述  11-43
  第一章 猪链球菌2型毒力因子的研究进展  11-23
    1 历史  11
    2 病原  11
    3 临床症状  11-12
    4 毒力因子  12-17
    5 尚存在的问题  17-18
    参考文献  18-23
  第二章 差减杂交在研究细菌病原上的应用  23-43
    1 抑制性差减杂交(SSH)  26
    2 PCR介导的差减技术的分子基础  26-29
    3 SSH的差减效率  29-31
    4 应用  31-37
    5 总结  37-39
    参考文献  39-43
研究报告  43-125
  第一章 103株猪链球菌7型菌株核糖体的分型  43-59
    1 材料与方法  43-46
    2 结果  46-53
    3 讨论  53-56
    参考文献  56-59
  第二章 54株猪链球菌7型菌株的PFGE分型  59-71
    1 材料与方法  59-61
    2 结果  61-66
    3 讨论  66-68
    参考文献  68-71
  第三章 猪链球菌7型菌株对13种抗生素的耐药性及基因型特征  71-81
    1 材料与方法  71-73
    2 结果  73-76
    3 讨论  76-78
    参考文献  78-81
  第四章 猪链球菌2型菌株毒力及无毒力代表株的核糖体分型、耐药性及抗性决定簇的检测  81-92
    1 材料与方法  81-85
    2 结果  85-87
    3 讨论  87-89
    参考文献  89-92
  第五章 猪链球菌2型可能的毒力基因的发现  92-116
    1 材料与方法  93-104
    2 结果  104-109
    3 讨论  109-112
    参考文献  112-116
  第六章 猪链球菌2型可能的毒力基因的分布  116-125
    1 材料与方法  116-118
    2 结果  118-121
    3 讨论  121-122
    参考文献  122-125
全文总结  125-127
附录  127-130
致谢  130-131
攻读博士期间发表的论文目录  131

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 病原细菌
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