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烟台地区规模化肉种鸡场免疫抑制性疫病的流行病学调查

作　者: 唐茂恒
导　师: 朱瑞良
学　校: 山东农业大学
专　业: 兽医
关键词: 鸡白血病病毒鸡传染性贫血病病毒鸡网状内皮组织增殖症病毒鸡呼肠孤病毒病病毒流行病学鉴定 PCR检测
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

鸡白血病(AL)、鸡传染性贫血病(CIA)、鸡网状内皮组织增殖症(RE)、鸡呼肠孤病毒病(Reo)4种免疫抑制病是目前鸡群中常见的免疫抑制性病毒。这些病毒除不同程度的引起机体发生原发感染之外,更严重的是以继发感染的形式出现,致使家禽的免疫系统受到损害,引起机体免疫功能下降,造成对多种致病因子易感性增强及疫苗免疫失败。根据近年的报道,种鸡和商品鸡均存在这些病毒的感染,并存在不同程度的共感染;种鸡群感染并垂直传播给商品鸡,间接引起了商品鸡群免疫能力降低,死亡率上升。因此,免疫抑制性疾病是目前养鸡业的潜在威胁,给养鸡业造成了巨大的经济损失。本研究分为三部分:一、ALV、CIAV、REV、ReoV的血清学调查本试验针对烟台地区有代表性的15个肉种鸡群的鸡白血病(AL)、鸡传染性贫血病(CIA)、鸡网状内皮组织增殖症(RE)、鸡呼肠孤病毒病(Reo)4种免疫抑制病进行了血清流行病学调查。主要采用了琼脂扩散试验、间接ELISA试验等诊断方法进行血清抗体检测。并对免疫抑制性传染病阳性鸡群的ND HI-Ab效价进行了检测,同时对烟台地区上述4种免疫抑制性疫病的临床病例进行调查分析,统计了近3年内烟台地区这4种疫病的感染及发病情况。结果表明免疫抑制性传染病感染鸡群后可使其免疫能力低下,ND HI-Ab效价显著降低,较正常值低3.5~4.5(log2)个抗体滴度。免疫抑制性疫病的存在是构成该地区肉种鸡场鸡群免疫失败、疫病流行的重要因素。二、REV、ALV、ReoV和CIAV的分子流行病学调查从烟台地区I、II、III三个规模化鸡场疑似免疫抑制性疾病感染鸡群中采集1046只鸡的脾脏,用组织DNA直接斑点杂交方法检测各样品中REV、ReoV、CIAV的感染状况。同时采集各个鸡只的泄殖腔棉拭子,用酶联免疫吸附试验检测禽白血病病毒p27抗原。结果表明所有鸡场中ALV感染率(42.6 %)最高,其次为REV(37.3%)。各地区都存在非常严重单独感染和多重感染,并且感染率从种鸡到商品鸡呈递增趋势。ALV在规模化鸡场II发病最频繁,REV在规模化鸡场III感染率最高。REV、ReoV、ALV和CIAV的广泛传播和多重感染是当前烟台各鸡场条件性致病菌发病率高、家禽生产性能下降的重要原因。三、免疫抑制病毒的分离鉴定及PCR诊断方法的建立本试验从烟台地区某肉种鸡场中AL、CIA、RE、Reo 4种典型症状病鸡的病变组织中各分离出一株病毒株。应用特异性PCR引物可扩增到各自预计长度的病毒核酸片段,由此分别确定为ALV、CIAV、REV、ReoV,四种病毒分离株分别命名为ALV-YT01、CIAV-YT01、REV-YT01、ReoV-YT01。将四种病毒分离株分别接种10日龄SPF鸡,均呈现典型的病理变化。分离毒株均能被各自的抗血清所中和,5周龄SPF鸡接种分离的细胞毒均可产生相应抗体。同时利用建立起的PCR检测方法对烟台地区其他肉种鸡场四种免疫抑制性疫病的疑似病例各40份进行检测,检出率分别为42.50%、37.50%、35.00%、27.50%,与传统的病毒分离法检测相比检测率大为提高。本研究对规模化鸡场进行了鸡白血病(AL)、鸡传染性贫血病(CIA)、鸡网状内皮组织增殖症(RE)、鸡呼肠孤病毒病(Reo)4种免疫抑制病的流行病学调查和病毒分离鉴定,并成功建立了相应病毒的PCR检测方法,为当地家禽疫病的控制提供了理论依据及技术支持。

全文目录

中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
综述  12-29
  1. 免疫抑制性疫病的研究进展  12-27
    1.1 免疫抑制性疫病的分类及其机理  12-14
    1.2 鸡群免疫抑制性病毒流行现状  14-17
    1.3 免疫抑制性疫病的分子生物学检测技术现状  17-20
    1.4 免疫抑制性疾病的危害和面临的挑战  20-22
    1.5 免疫抑制性疾病的防控技术现状  22-24
    1.6 免疫抑制性疾病的防控前景展望  24-26
    1.7 免疫抑制的解除  26-27
  2. 本研究的目的及意义  27-29
试验一 ALV、REV、CIAV、ReoV 的血清学调查  29-37
  1. 材料和方法  29-33
    1.1 材料  29-31
    1.2 方法  31-33
  2. 结果  33-35
    2.1 肉种鸡群琼脂免疫扩散试验检测结果  33-34
    2.2 AL、RE、CIA、Reo 间接ELISA 抗体检测结果  34
    2.3 烟台地区病例统计结果  34-35
    2.4 阳性鸡群ND HI-Ab 效价和细菌感染率检测结果  35
  3. 讨论  35-37
试验二 REV、ALV、MDV和CIAV分子流行病学调查  37-45
  1. 材料和方法  37-40
  2. 结果与分析  40-43
  3. 讨论  43-45
试验三免疫抑制病毒的分离鉴定及 PCR 诊断方法的建立  45-58
  1. 材料与方法  45-51
    1.1 材料  45-46
    1.2 方法  46-47
    1.3 病毒的细胞培养  47
    1.4 病毒感染力的测定：Reed-Mueneh 法计算TCID50  47-48
    1.5 动物回归试验  48
    1.6 PCR 扩增试验  48-51
    1.7 CIAV、ALV、REV，ReoV PCR 诊断方法的应用  51
  2. 结果  51-56
    2.1 培养基上无支原体或细菌  51
    2.2 鸡胚病毒接种结果  51-52
    2.3 病毒感染力的测定结果  52
    2.4 动物回归试验结果  52-53
    2.5 PCR 扩增电泳检测结果  53-54
    2.6 CIAV、ALV、REV、ReoV PCR 诊断方法的应用  54-55
    2.7 PCR 方法应用结果  55-56
  3. 讨论  56-58
结论  58-59
参考文献  59-65
致谢  65-66
个人简介  66

烟台地区规模化肉种鸡场免疫抑制性疫病的流行病学调查

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