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灰色链霉菌二次生长及whiG基因的研究

作　者: 陈国华
导　师: 梁智群
学　校: 广西大学
专　业: 微生物
关键词: 灰色链霉菌 whiG基因 σ因子二次生长原生质体
分类号: Q933
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

链霉菌是丝状多细胞土壤放线菌，土壤逆环境诱导链霉菌具有复杂形态分化生命周期，获得合成大量有用次生代谢物能力。某些链霉菌在液体培养基中表现独特的多相生长动力学特征：第一次对数生长之后，细胞生长过渡性地停止，这个过渡期可能起着一个重要的发育调控开关作用，启动细胞第二次对数生长。生理压力诱导特定RNA聚合酶σ因子表达，指导适应性调控蛋白转录。途经双元件调控系统和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的信号传导调控链霉菌的形态和生理分化。whiG基因编码一个发育上重要的RNA聚合酶σ因子，特异性地起始发育程序，决定菌丝细胞的发育命运。本研究通过测定菌液的OD₅₆₀，发现并确证了灰色链霉菌存在二次生长现象。生长过渡期开始于接种后19小时，持续3小时。实验结果具有重复性。通过PCR方法以灰色链霉菌总DNA为模板克隆到一个1Kb大小的DNA片段，连接到pGEM-3Zf（+），构建了pLZ1。经测序和序列分析，证实该片段长975bp，GC含量68.3％，含有一个完整的ORF，编码278氨基酸残基，推测其蛋白产物是RNA聚合酶σ因子。PCR法克隆whiG基因内部304bp片段，连接到大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒吓0139，构建了基因阳坏用重组质粒贼Q139：：凸MG，命名pLZ107。转化甲基化缺陷型大肠杆菌ET12567。考察了影响原生质体形成和再生的因素。获得了灰色链霉菌原生质体形成和再生的最优条件，即用 YMPD培养基，加 0．5％的甘氨酸，30”C，200rpm培养40，J’时，溶菌酶工作浓度 lmglml，30”C保温 1小时。在此条件下，原生质体制备量达 10勺ml。试验了几种不同链霉菌再生培养基培养原生质体，发现＊优于 RZYE和 SPMR，再生率M。多次尝试用PLZ107转化链霉菌原生质体未获成功。考察了几种影响转化的因素。讨论了质粒DNA不能转化灰色链霉菌原生质休可能的原困。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-9
第一章综述  9-25
  前言  9
  一、链霉菌发育生物学  9-19
  二、链霉菌遗传转化方法学  19-22
  三、链霉菌whiG基因编码发育上重要的RNA聚合酶σ因子  22-24
  四、本工作的目的  24-25
第二章灰色链霉菌生长动力学特征的研究  25-31
  2.1 引言  25
  2.2 材料与方法  25-27
  2.3 结果  27
  2.4 讨论  27-31
第三章灰色链霉菌whiG基因的克隆和重组质粒pKC1139::△whiG的构建  31-44
  3.1 引言  31
  3.2 材料与方法  31-36
  3.3 结果  36-40
  3.4 讨论  40-44
第四章灰色链霉菌原生质体制备和再生条件的研究  44-51
  4.1 引言  44
  4.2 材料与方法  44-46
  4.3 结果  46-50
  4.4 讨论  50-51
第五章重组质粒pLZ107转化灰色链霉菌原生质体的研究  51-56
  5.1 引言  51
  5.2 材料与方法  51-53
  5.3 结果  53-54
  5.4 讨论  54-56
第六章总结与展望  56-58
参考文献  58-70
致谢  70

灰色链霉菌二次生长及whiG基因的研究

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