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苜蓿和草木樨体细胞融合的基础研究

作　者: 毛雅妮
导　师: 张德罡；孙娟
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 草业科学
关键词: 苜蓿白花草木樨愈伤组织体细胞胚原生质体体细胞融合
分类号: S541.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

苜蓿蛋白质含量约占总干物质量的17%～20%,维生素和无机盐含量也丰富多样,草木樨耐旱、耐寒、耐盐碱性、耐贫瘠性强,本试验通过对两者组织培养的研究,为体细胞融合提供前提条件,得到具有苜蓿高营养价值和草木樨抗逆性强的新品种积累科学技术材料。本试验研究了甘农1号、巨人、WL324和三得利4个苜蓿品种通过体细胞胚途径建立再生体系的过程,观察了甘农1号体细胞胚的细胞学结构;探讨了基本培养基、培养时间和激素等对白花草木樨的愈伤组织诱导的影响;以甘农1号和白花草木樨子叶为材料解离原生质体,并对其培养。主要研究结果如下:1.本试验通过培养时间、外植体、激素、光照强度等因素筛选最佳诱导苜蓿愈伤组织的条件,研究得到一套完整的组织培养再生体系,并对体细胞胚进行细胞学观察。研究结果表明:(1)甘农1号愈伤组织诱导的最佳培养时间为14d,外植体为下胚轴,激素组合为2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT;不同光照条件对愈伤组织诱导率影响不明显,均为100%,光暗交替条件下诱导的愈伤组织生长更快、更旺盛,颜色稍显绿或黄绿相间,但褐化率较高。(2)将愈伤组织转移到体细胞胚发生培养基上,4个苜蓿品种在光暗交替条件下诱导的愈伤组织更易形成体细胞胚,以甘农1号的体细胞胚发生率最高,在20.83%～56.25%之间,再依次为巨人,三得利和WL324;最佳的体细胞胚发生培养基为UM+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L KT,发生率达56.25%;研究还发现适量的PEG6000对体细胞胚发生有促进作用,以6% PEG6000最佳。(3)细胞学观察表明体细胞胚发生经历了球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚4个阶段。2.本试验研究了白花草木樨基本培养基、外植体、培养时间和激素对愈伤组织诱导的影响。结果表明:UM培养基愈伤组织诱导率最高,为最佳基本培养基;3个外植体中下胚轴愈伤组织生长最旺盛,诱导率最高,为最佳外植体;愈伤组织诱导21d后达到旺盛期,诱导率最高,为最佳培养时间;2,4-D和KT浓度越高,形成的愈伤组织越坚硬、越干燥,子叶和下胚轴的愈伤组织诱导率越低,而幼根则先促进后抑制。3.本试验以甘农1号杂花苜蓿和白花草木樨子叶为材料解离和培养原生质体,结果表明:甘农1号以2.5% R-10纤维素酶+0.5% R-10离析酶解离12h获得的原生质体产量最高,为46.75×106个/g,为最佳酶液组合;白花草木樨用2.0%纤维素酶+0.5% R-10离析酶+0.5%果胶酶处理24h获得的原生质体产量为5.00×106个/g。杂花苜蓿和白花草木樨原生质体培养基都为KM8P+1.5 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT,培养2月后长至肉眼可见的小愈伤组织。

全文目录

项目来源  2-3
主要英文缩略词表  3-4
摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章绪论  9-22
  1 前言  9
  2 组织培养的理论基础  9-16
    2.1 细胞全能性及其表达  9-10
    2.2 愈伤组织的诱导  10-11
    2.3 体细胞胚发生  11-13
    2.4 原生质体解离和培养  13-16
  3 苜蓿和草木樨组织培养的研究进展  16-20
    3.1 苜蓿组织培养技术的研究现状  17-19
    3.2 草木樨组织培养技术的研究现状  19-20
  4 豆科牧草组织培养存在的问题及应用前景  20-22
第二章苜蓿愈伤组织的诱导和再生体系的建立  22-36
  1 材料与方法  22-26
    1.1 试验材料  22-23
    1.2 试验方法  23-26
  2 结果与分析  26-31
    2.1 愈伤组织诱导的调控  26-29
    2.2 体细胞胚的发生情况  29-31
    2.3 体细胞胚的细胞学结构  31
    2.4 体细胞胚萌发成苗  31
  3 讨论  31-36
    3.1 愈伤组织的形成过程  31-32
    3.2 外植体对愈伤组织诱导的影响  32
    3.3 激素对愈伤组织诱导的影响  32
    3.4 光照对愈伤组织诱导的影响  32-33
    3.5 体细胞胚发生的一般过程  33-34
    3.6 品种对体细胞胚发生的差异  34
    3.7 基本培养基对体细胞胚发生的影响  34
    3.8 不同光照条件下诱导的愈伤组织对分化的影响  34
    3.9 聚乙二醇对体细胞胚发生的影响  34-35
    3.10 体细胞胚萌发  35-36
第三章白花草木樨愈伤组织的诱导  36-46
  1 材料与方法  36-37
    1.1 试验材料  36
    1.2 试验方法  36-37
  2 结果与分析  37-43
    2.1 培养时间对愈伤组织诱导的调控  37
    2.2 培养基对愈伤组织诱导的调控  37-38
    2.3 激素对不同外植体愈伤组织诱导的影响  38-43
  3 讨论  43-46
    3.1 不同外植体愈伤组织诱导的差异性  43
    3.2 激素对愈伤组织诱导的影响  43-46
第四章甘农1 号杂花苜蓿和白花草木樨原生质体的分离与培养  46-52
  1 材料与方法  46-49
    1.1 试验材料  46-47
    1.2 试验方法  47-49
  2 结果与分析  49-50
    2.1 原生质体的分离  49
    2.2 原生质体的培养与小愈伤组织的形成  49-50
  3 讨论  50-52
    3.1 原生质体游离  50
    3.2 原生质体培养  50-52
第五章结论与展望  52-54
  1 结论  52-53
  2 展望  53-54
参考文献  54-60
附录（图版）  60-63
致谢  63-64
个人简介  64-65
导师简介  65-66
指导老师简介  66-67

苜蓿和草木樨体细胞融合的基础研究

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