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登革病毒1-4型E蛋白结构域Ⅲ融合蛋白的表达纯化及功能研究
作 者: 牛国宇
导 师: 徐方；李德新
学 校: 宁夏医科大学
专 业: 遗传学
关键词: 登革病毒 包膜蛋白 结构域Ⅲ 原核表达 真核表达
分类号: R392
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 30次
引 用: 0次
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内容摘要
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目的研究原核表达的登革病毒(dengue virus,DV)1-4型融合的E蛋白结构域III直接抑制登革病毒感染及其抗体的中和作用;研究rEIII融合蛋白在昆虫表达系统的分泌表达情况,探讨不同表达系统对融合蛋白功能的影响。方法①通过连接肽将1-4型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区串联起来,将串联基因产物插入PET30a在大肠杆菌中进行表达、纯化后,应用Western blot及间接ELISA验证表达产物。将融合蛋白新西兰大白兔制备免疫血清,应用间接免疫荧光检测以确定多抗血清的活性。将融合蛋白及多抗血清分别进行阻断实验和中和实验,对抗原及抗体的功能进行研究。②将rEIII基因克隆到杆状病毒表达载体pAcSecG2T上,转染SF9细胞,传代增强毒力,间接免疫荧光结果显示,融合蛋白在昆虫表达系统中传代5代后表达明显增强,分别收集细胞及细胞培养液.ELISA及Western blot检测融合蛋白分泌表达情况。结果在大肠杆菌中成功表达了串联的登革病毒1～4型E蛋白结构域III融合蛋白,并得到兔抗免疫血清,分别对融合蛋白及兔抗免疫血清进行验证,进行了一系列功能试验。融合蛋白能够阻断1-4型DV感染,兔抗免疫血清能中和1-4型DV,但中和抗体效价不同。同时利用昆虫表达系统表达纯化了真核rEIII融合蛋白,为以后登革病毒抗原表位的筛选和疫苗研究打下了基础。结论串联表达的登革病毒包膜蛋白Ⅲ区可抑制登革病毒感染,串联rEⅢ蛋白免疫新西兰大白兔产生的针对DV1-4型包膜蛋白结构域Ⅲ区的抗体对登革病毒具有中和作用。融合蛋白可以在昆虫表达系统细胞内高表达,但极少分泌。
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全文目录
摘要 4-5
Abstract 5-10
前言 10-13
第一章 13-44
材料与方法 13-32
实验结果 32-41
讨论 41-43
小结 43-44
第二章 44-63
材料与方法 44-57
实验结果 57-61
讨论 61-62
小结 62-63
全文总结 63-64
参考文献 64-67
文献综述 67-76
综述参考文献 73-76
致谢 76-78
攻读学位期间发表的学术论文目录 78-79
作者简介 79
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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