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RNA干扰技术抑制人卵巢癌细胞VEGF基因表达及内皮抑素基因治疗实验研究
作 者: 韩庆旺
导 师: 徐根兴
学 校: 第二军医大学
专 业: 细胞生物学
关键词: RNA干扰 小发夹RNA VEGF 卵巢癌 增殖 双歧杆菌 穿梭载体 内皮抑素
分类号: R737.31
类 型: 硕士论文
年 份: 2005年
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内容摘要
RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)能特异性抑制相应基因序列的mRNA表达。本研究试图研究小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)载体介导抑制人卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的表达和对卵巢癌细胞增殖的影响。采用脂质体介导的方法将抗VEGF小发夹状双链RNA真核基因表达载体转染到人卵巢癌细胞(HO-8910)中,用G418筛选获得阳性克隆。用Westernblot、RT-PCR检测VEGF基因在卵巢癌细胞中的表达;通过MTT及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。研究结果表明,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的HO-8910细胞中VEGF表达量明显减少;细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少。VEGF小发夹RNA质粒载体可显著抑制HO-8910细胞中的VEGF基因的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖。这为肿瘤的基因治疗又探索出一条可行的治疗途径。另外构建了大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体,分别在两种菌中了表达人内皮抑素基因,为今后用双歧杆菌作为生理菌载体进行肿瘤的基因治疗奠定了基础。
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全文目录
第一章 以VEGF为靶向的抗血管生成基因治疗研究进展 7-38 1 VEGF在肿瘤血管生成中的地位 7 2 血管内皮细胞因子及其受体 7-9 3 VEGF的表达和调节 9-12 4 VEGF的功能 12-14 5 VEGF激活的基因 14-15 6 针对VEGF的基因治疗策略 15-28 7 结语 28-29 8 参考文献 29-38 第二章 RNA干扰技术抑制人卵巢癌细胞VEGF基因表达及细胞增殖的实验研究 38-64 1 中文摘要 38 2 英文摘要 38-39 3 前言 39 4 材料和方法 39-55 5 结果 55-58 6 讨论 58-62 7 参考文献 62-64 第三章 大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体的构建及内皮抑素基因的表达研究 64-86 1 中文摘要 64 2 英文摘要 64-65 3 前言 65 4 材料和方法 65-77 5 结果 77-82 6 讨论 82-83 7 参考文献 83-86 研究生期间发表的论文 86-87 致谢 87-88 附录(一) 中英文对照 88-89 附录(二) 主要试剂的配制 89-95
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
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