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我国五个地方畜禽品种种质资源成纤维细胞系的构建及生物学特性研究

作　者: 梁海青
导　师: 岳文斌；关伟军
学　校: 山西农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 畜禽品种成纤维细胞系细胞培养核型分析同工酶分析转染
分类号: S813.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 88次
引　用: 4次
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内容摘要

本研究取蒙古羊耳缘组织块,14 日胚胎北京鸭,8 日胚胎清远麻鸡、藏鸡和狼山鸡,采用组织块贴壁培养法,成功构建并冷冻了五个畜禽品种遗传资源成纤维细胞系。细胞冻存代数在5 代以内,冻存密度为3×106个细胞/ml,每个品种的样本含量在30～60 个之间,保存管数达150～180 支,根据建系要求,对成纤维细胞的生物学性状进行分析,所得结果如下: 1 培养细胞形态为典型的成纤维状,为梭形或不规则三角形,细胞在生长时呈放射状、火焰状或旋涡状走形,清远麻鸡的细胞形态与藏鸡和狼山鸡相比,胞质向外伸出的突起较多,且较短。可作为该品种区别于其它品种的显著特征。2 生长曲线结果显示,五种动物的生长曲线均呈“S”型,细胞经历了潜伏期、指数生长期和停滞期。3 细胞冻存前后存活率结果表明,五种动物细胞在冷冻和复苏过程中可能受到一定的损伤,复苏后存活率有所下降,但均保持在90%以上。4 微生物检测结果呈阴性,表明细胞未受到细菌、真菌、病毒及支原体污染。5 染色体核型分析结果为, 蒙古羊的二倍体染色体数目2n=54,北京鸭2n =78,清远麻鸡、藏鸡、狼山鸡2n=78±。五种动物细胞染色体均能保持二倍体性状,遗传性能稳定,可以作为物种鉴别的依据。6 LDH 和MDH 同工酶酶谱结果表明,各品种之间的同工酶谱带存在显著差异,因此可判断没有受到细胞系间的交叉污染。7 绿色荧光蛋白基因在培养细胞中的表达表明Lipofectin 能有效介导重组质粒pEGFP-N3 转染成纤维细胞,转染率与细胞生长汇合程度、脂质体包被质粒的浓度比例及转染时间直接相关。本实验中当细胞汇合度达70～80%时,用2μl 脂质体介导1.5μg 重组质粒转染10h 即可获得较满意的转染效率。转染率分别为蒙古羊52%、北京鸭23%、清远麻鸡33%、藏鸡20%、狼山鸡19%。本实验构建的成纤维细胞系符合ATCC 要求的细胞系鉴定项目,不仅使畜禽遗传资源在细胞水平永久保存下来,而且为分子生物学研究提供宝贵材料。

全文目录

摘要  5-6
文献综述  6-21
  1 体外细胞培养的概述  6-8
  2 动物细胞的培养方法  8-11
  3 细胞库的发展  11-12
  4 动物细胞的应用  12-14
  5 细胞培养物冷冻保存的原理和方法  14
  6 细胞系的生物学分析  14-19
  7 五个畜禽品种介绍  19-20
  8 本实验建立细胞系的意义  20-21
材料与方法  21-31
  1 实验材料  21-25
  2 实验方法  25-31
结果与分析  31-44
  1 成纤维细胞形态特征  31
  2 细胞存活率  31-32
  3 细胞生长动力学  32-34
  4 微生物检测结果分析  34
  5 五种动物成纤维细胞的染色体核型分析  34-37
  6 同工酶酶谱结果  37-39
  7 绿色荧光蛋白基因在培养细胞中的表达结果  39-44
讨论  44-50
  1 细胞培养方法  44
  2 实验取材  44
  3 细胞培养  44-45
  4 细胞纯化  45
  5 细胞培养条件  45-46
  6 细胞冷冻和复苏  46-47
  7 微生物影响  47
  8 支原体的去除  47
  9 染色体核型分析  47-48
  10 绿色荧光蛋白基因在培养细胞中的表达  48-50
结论  50-52
  1 成纤维细胞库的构建  50
  2 细胞活力检测结果  50
  3 微生物检测结果  50
  4 染色体核型分析结果  50
  5 同工酶分析结果  50
  6 绿色荧光蛋白基因在培养细胞中的表达  50-52
参考文献  52-56
Abstract  56-57
附录  57-66

我国五个地方畜禽品种种质资源成纤维细胞系的构建及生物学特性研究

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