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纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料复合大鼠成骨细胞培养的实验研究

作　者: 徐培
导　师: 吴海珍
学　校: 安徽医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 成骨细胞细胞培养支架材料生物相容性
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景:在口腔种植的治疗中,常遇到由于各种原因导致骨量不足的病例,从而无法在有限的牙槽骨上直接植入种植体。虽然目前普遍认为最安全、临床应用最多的仍是自体骨移植,但自体骨移植存在感染和增加患者痛苦等缺点。近年来,随着骨组织工程的研究迅速发展,骨修复与再生找到了合乎生物学原则的思路。支架材料是组织工程骨的基本构架,它是种子细胞外基质(ECM)的替代物,引导细胞增殖分化与新骨形成,是组织工程骨的重要组成部分,也是骨组织工程研究的关键问题之一。在目前研究的支架材料中,有机材料具有良好的生物相容性和可降解性,但机械强度差;无机材料的机械强度基本满足要求,缺点是可降解性差。因此合成有机/无机复合材料是一条理想的新路。目的:本实验中,我们自主合成了纳米羟基磷灰石/壳聚糖(nHA/CS)复合多孔支架材料,并选用SD大鼠的成骨细胞作为种子细胞,与nHA/CS支架材料进行体外复合培养,检测其生物相容性,为选择骨组织工程支架材料提供实验依据。方法:采用共沉淀法和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS支架材料,并对材料行扫描电镜和透射电镜观察;原代培养SD大鼠成骨细胞,倒置显微镜作细胞形态学观察,碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红钙染色对细胞进行鉴定。将第3代成骨细胞与nHA/CS支架材料体外复合培养,采用MTT比色法和生长曲线描绘测定支架材料对细胞增殖的影响,并用扫描电镜观察细胞在材料表面的生长情况。用SPSS13.0软件包对测定结果进行单因素方差分析。结果:(1)通过扫描电镜和透射电镜观察,合成的nHA/CS支架材料呈三维空间网状结构,孔径在40-60nm之间。(2)经原代、传代培养的SD大鼠成骨细胞生长良好,细胞形状不规则,多呈三角形、多角形,有较多突起,单核,核呈卵圆形。细胞突起互相连接。细胞汇合后呈铺路石状,并可重叠生长。ALP染色可见成骨细胞的胞浆中有浅棕色至棕黑色色素颗粒。细胞形成的钙结节茜素红染色呈橘红色。(3)大鼠成骨细胞能够在nHA/CS材料上附着增殖、分泌细胞外基质,其生长良好,生理功能不受抑制。结论:纳米羟基磷灰石/壳聚糖复合多孔支架材料与成骨细胞具有良好的生物相容性,作为骨组织工程的支架材料展现出良好的前景。

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缩略词表 5-6摘要 6-8Abstract 8-101 前言 10-142 材料与方法 14-20 2.1 实验材料 14-16 2.1.1 实验动物 14 2.1.2 主要试剂 14-15 2.1.3 主要仪器 15 2.1.4 部分试剂的配置 15-16 2.2 实验方法 16-20 2.2.1 复合材料的合成及表征观察 16-17 2.2.2 成骨细胞的培养与鉴定 17-19 2.2.3 成骨细胞复合支架材料的体外培养与观察 19-20 2.2.4 统计分析 203 结果 20-28 3.1 材料的表征 20-21 3.2 成骨细胞的培养与鉴定 21-25 3.3 成骨细胞复合支架材料的体外培养与观察 25-284 讨论 28-325 结论 32-33参考文献 33-38附录 38-39致谢 39-40 综述 40-47 参考文献 44-47

纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料复合大鼠成骨细胞培养的实验研究

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