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大鼠KCTD10基因的克隆及功能研究

作　者: 任凯群
导　师: 张健；周建林
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学及分子生物学
关键词: 大鼠 KCTD10 基因克隆免疫共沉淀肿瘤坏死因子α
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一个多功能的细胞因子,在许多细胞生理过程中起重要作用,比如细胞凋亡、细胞增殖、B细胞激活、肝细胞的再生以及一些急性的细胞炎症反应等。人类的PDIP1(polymerase delta-interacting protein 1)是一种受TNF-α和白介素6(IL-6)诱导的蛋白,并且能与增殖细胞核抗原(PCNA)和DNA聚合酶δ的小亚基有相互作用。PDIP1家族的另一个成员TNFAIP1蛋白(又称为B12基因),能够受TNF-α诱导,并且能与PCNA、P50相互作用。在大鼠中,也证实了PDIP1和TNFAIP1基因的存在并且已被克隆。我们用大鼠的PDIP1基因在GeneBank中搜寻到了一组与PDIP1有较大的序列相似性的EST,并且通过RACE扩增出了其cDNA全长,命名为KCTD10(Potassium Channel Tetramerisation Domain-containing 10)。大鼠KCTD10与PDIP1及TNFAIP1在氨基酸序列上高度保守,在N端区域,都有一个BTB/POZ的结构域;而在C端区域,则是PCNA的结合基序(QTKV-EFP)。根据PDIP1和TNFAIP1能够与PCNA和P50相互作用,我们用免疫共沉淀等方法确定了大鼠KCTD10与PCNA以及P50之间也有相互作用。同样,因为TNF-α能够诱导PDIP1和TNFAIP1基因的表达,我们通过TNF-α诱导NIH3T3细胞从而使KCTD10基因的表达水平升高,从而得出KCTD10同样能够被TNF-α诱导的结论,因而从功能上证明了KCTD10与PDIP1、TNFAIP1之间的同源性。Northern Blot和实时定量PCR显示KCTD10

全文目录

英文缩写表  3-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-11
前言  11-15
第一部分材料与方法  15-35
  1 材料  15-20
    1.1 主要仪器设备  15-16
    1.2 菌种和细胞株  16
    1.3 载体和工具酶  16-17
    1.4 抗体  17
    1.5 试剂盒  17
    1.6 其它试剂  17-18
    1.7 所需溶液  18-20
  2 方法  20-35
    2.1 大鼠 KCTD10基因的克隆及序列分析  20-27
    2.2 KCTD10基因在各个组织中的表达分析  27-29
    2.3 TNF-α诱导大鼠KCTD10基因的表达  29-31
    2.4 KCTD10与p50，PCNA相互作用分析  31-35
第二部分结果与分析  35-49
  1.大鼠KCTD10基因的克隆及序列分析  35-41
    1.1 大鼠脑组织总RNA的提取  35-36
    1.2 大鼠KCTD10基因的克隆  36-38
    1.3 大鼠KCTD10基因的序列分析  38-41
  2 大鼠KCTD10基因在各个组织中的表达分析  41-43
  3 TNFα诱导KCTD10基因的表达  43-44
  4 KCTD10基因与p50，PCNA相互作用分析  44-49
    4.1 免疫共沉淀表达载体的构建  44-46
    4.2 KCTD10与PCNA和p50的免疫共沉淀分析  46-49
第三部分讨论  49-52
参考文献  52-59
发表论文  59-60
致谢  60-61
附录Ⅰ  61-62
附录Ⅱ  62

大鼠KCTD10基因的克隆及功能研究

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