微血管内皮细胞的体外分离培养目的:探索简单、有效地获取大鼠微血管内皮细胞的体外培养方法。方法:用机械分离和酶消化法将大鼠心肌消化后,利用不锈钢筛网过滤细胞悬液和差数贴壁方法纯化,相差显微镜下观察细胞形态,Ⅷ因子相关抗原荧" />

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TNFα诱导大鼠心肌微血管内皮细胞纤维介素表达及功能的研究

作　者: 陈宇
导　师: 王朝晖
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 微血管内皮细胞体外培养心肌大鼠微循环肿瘤坏死因子α 内皮细胞 fgl2凝血酶原酶
分类号: R541
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

第一部分大鼠心肌内皮细胞的学位论文">微血管内皮细胞的体外分离培养目的:探索简单、有效地获取大鼠微血管内皮细胞的体外培养方法。方法:用机械分离和酶消化法将大鼠心肌消化后,利用不锈钢筛网过滤细胞悬液和差数贴壁方法纯化,相差显微镜下观察细胞形态,Ⅷ因子相关抗原荧光免疫细胞化学染色进行鉴定。结果:培养4小时后有细胞贴壁;24h后细胞分裂生长;3天后贴壁细胞覆盖大部分培养瓶面,约90%的细胞汇合成单层;细胞汇合后呈现典型的“铺路石”样内皮细胞特征,内皮细胞标志物Ⅷ因子相关抗原表达阳性,纯度在90%以上。结论:改良的体外培养方法能简单、高效获得纯度较高大鼠原代微血管内皮细胞,适用于微血管内皮细胞的分离与培养,为下一步微血栓形成机制研究奠定基础。第二部分TNFα诱导大鼠心肌微血管内皮细胞纤维介素表达及功能的研究目的:研究细胞因子TNFα对体外培养的大鼠心肌微血管内皮细胞fgl2表达的影响以及fgl2蛋白的促凝功能。方法:分别用免疫荧光组织化学染色,Western blot技术检测大鼠心肌微血管内皮细胞在静息和细胞因子TNFα作用下fgl2凝血酶原酶蛋白水平的表达,并用单相凝集试验检测细胞因子TNFα刺激前后微血管内皮细胞的促凝功能。结果:1.免疫荧光组织化学染色和Western blot显示不同浓度的TNFα可显著促进心肌微血管内皮细胞表达fgl2蛋白,与正常对照组相比具有显著差异(P<0.05)。2. TNFα12.5ng/ml组,25ng/ml组刺激后的微血管内皮细胞促凝活性明显升高,与正常对照组比较具有显著差异,(1.4527±0.186 vs -0.170±0.038和4.78±0.070 vs -0.170±0.038,P<0.05)。结论:TNFα能够上调微血管内皮细胞fgl2蛋白的表达,并且具有浓度依赖性,提示fgl2表达与炎症因子激活的程度有关;TNFα诱导表达的fgl2具有促凝活性,提示fgl2介导的微血栓形成是炎症免疫凝血过程。

全文目录

中英文缩略词表  5-6
前言  6-11
  参考文献  8-11
摘要  11-13
Abstract  13-15
1 第一部分大鼠心肌内皮细胞的学位论文">微血管内皮细胞体外分离培养  15-22
  1.1 材料  15-17
  1.2 方法  17-18
  1.3 结果  18-19
  1.4 讨论  19-21
  1.5 参考文献  21-22
2 第二部分 TNFα诱导大鼠心肌微血管内皮细胞f912 表达及功能的研究  22-39
  2.1 材料  22-26
  2.2 方法  26-30
  2.3 结果  30-33
  2.4 讨论  33-36
  2.5 结论  36
  2.6 参考文献  36-39
本课题资助基金项目  39
附录攻读硕士学位期间发表文章  39-40
致谢  40

TNFα诱导大鼠心肌微血管内皮细胞纤维介素表达及功能的研究

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