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α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的影响及机制

作　者: 孟洁
导　师: 段斐
学　校: 河北大学
专　业: 药理学
关键词: α玉米赤霉醇 成骨细胞 凋亡:c-jun NO PMOP
分类号: R580
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:利用体外细胞培养的方法观察α-ZAL对大鼠成骨细胞增殖、成骨细胞内NO含量以及成骨细胞内c-jun基因的表达情况等,探讨α-ZAL对大鼠成骨细胞的影响,为其应用于绝经后骨质疏松症的治疗提供理论依据。方法:取新生SD大鼠（24h）,断头处死后,用75%的酒精浸泡消毒10分钟,酒精中取出大鼠,从颈部沿头盖骨剥离皮肤,取下头盖骨,剔净、漂洗、剪碎。加入0.25%胰蛋白酶消化20min后,用PBS洗涤;加入0.1%胶原酶放入CO2培养箱中1h后,加细胞培养液,吹打均匀;实验时将细胞以105个/m1的密度接种于培养板,置培养箱中培养;待细胞贴壁,吸去培养液,换上新的培养液。将细胞分四组:正常组（加入正常培养液）、雌激素组(加入含雌激素10-10 mol/L培养液)、10-7 mol/Lα-ZAL浓度组和10-10 mol/Lα-ZAL浓度组,加入相应药物,然后在不同时间检测以下指标:（1）流式细胞术检测不同浓度α-ZAL对成骨细胞凋亡的影响。（2）试剂盒检测各组成骨细胞内NO含量的变化。（3）免疫组化方法检测各组成骨细胞内c-jun基因的表达情况。结果:（1）雌激素组、α-ZAL10-7 mol/L组和α-ZAL10-10 mol/L组成骨细胞凋亡率均低于正常组,其中α-ZAL对成骨细胞的影响要低于雌激素。（2）各浓度α-ZAL均使成骨细胞NO含量明显增加, 24h时随α-ZAL浓度增加,NO含量也逐渐增加, 10-10mol/L时升高作用明显。48h结果显示:α-ZAL10-7 mol/L和α-ZAL10-10 mol/L均能增加细胞中NO含量,但α-ZAL10-10 mol/L对成骨细胞的影响要弱与α-ZAL10-7 mol/L。（3）10-10 mol/L E2组,10-7 mol/Lα-ZAL浓度,10-10mol/Lα-ZAL浓度组较正常组在胞质表达深,正常组表达较浅,说明10-7 mol/Lα-ZAL浓度,10-10 mol/Lα-ZAL浓度组可以通过c-jun来抑制成骨细胞的凋亡。结论:（1）α-ZAL能抑制成骨细胞的凋亡,促进其增殖。（2）α-ZAL能调节成骨细胞内NO含量,可能与其对成骨细胞的调节作用有关。（3）α-ZAL能上调成骨细胞内c-jun基因的表达。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-11
第1章 文献综述  11-28
  1.1 前言  11-12
  1.2 绝经后骨质疏松症的定义  12
  1.3 PMOP 的病因及发病机制  12-14
    1.3.1 雌激素和骨代谢  12-13
    1.3.2 PMOP 症发生的其他机制  13-14
  1.4 绝经后骨质疏松症的治疗进展  14-18
    1.4.1 雌激素  14
    1.4.2 选择性雌激素受体调节剂（SERMs）  14-15
    1.4.3 双磷酸盐类（Bisphosphonates,BPs）  15-16
    1.4.4 降钙素（Calcitonin,CT）  16
    1.4.5 甲状旁腺激素（Parathyroid hormone，PTH）和PTH 类似物  16-17
    1.4.6 氟化物  17
    1.4.7 雄激素及同化类固醇  17
    1.4.8 他汀类药物  17
    1.4.9 维生素D  17-18
    1.4.10 钙剂  18
  1.5 植物雌激素与绝经后骨质疏松症  18-23
    1.5.1 植物雌激素的概念及分类  18-19
    1.5.2 植物雌激素的作用机制  19-20
    1.5.3 植物雌激素与绝经后骨质疏松的研究进展  20-21
    1.5.4 新的植物雌激素—α-玉米赤霉醇（α-ZAL）  21-23
  参考文献  23-28
第2章 α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞的影响及机制  28-41
  2.1 引言  28
  2.2 材料  28-29
    2.2.1 仪器与试剂  28
    2.2.2 动物  28-29
  2.3 方法及结果  29-35
    2.3.1 大鼠成骨细胞的分离培养  29
    2.3.2 流式细胞术检测成骨细胞的凋亡  29
    2.3.3 NO 浓度检测  29-30
    2.3.4 c-jun 测定方法  30-31
    2.3.5 统计学处理  31
    2.3.6 实验结果  31-35
  2.4 讨论  35-39
  参考文献  39-41
结论  41-42
致谢  42

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病
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