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奥曲肽对胃癌细胞Akt及ZAC的效应

作　者: 李静亚
导　师: 丁一
学　校: 郑州大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 胃癌细胞 生长抑素 奥曲肽 Akt ZAC
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


胃肠道内分泌细胞中的D细胞可分泌生长抑素（somatostatin,SST）,SST在人体内有两种生物活性形式:SST-14和SST-28,它们分别由14和28个氨基酸构成。这种环形的小肽由较大的前体分子前原SST及原SST水解而成。SST抑制胰酶分泌和胆汁分泌,还抑制内分泌激素如分泌素、胰岛素、胰高血糖素和血管活性肠肽的分泌。SST不仅能够调控神经传递和激素的分泌,还对正常组织以及肿瘤的细胞增殖有一定的调节作用。生长抑素受体（somatostatin receptor,SSTR）属于G蛋白耦联受体（Gprotein-coupled receptor,GPCR）,包括SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4和SSTR5。SST及其类似物主要是通过与细胞表面的SSTR相互作用,继而活化受体后信号转导通路而发挥其效应。Akt是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,是由akt1和akt2基因的编码产物,与病毒癌基因v-akt高度同源。由于Akt与PKA、PKC家族有同源性,因此也被称为PKB。Akt在对生长因子效应的信号传导途径中起重要作用,能够调控细胞的生长、转录和营养代谢。Akt信号传导途径被抑制之后,可引起肿瘤细胞的凋亡和生长抑制。SST类似物可抑制Akt活性,并且可显著抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞凋亡。介导SST抗增殖效应的转录因子以及靶基因的研究很少。调控凋亡和细胞周期阻滞的锌指蛋白（zinc finger protein which regulates apoptosis and cell cycle arrest,ZAC）为一种转录因子,在人体内广泛表达,具有转录活化活性和DNA结合功能。ZAC可诱导细胞凋亡和细胞G1期阻滞,从而抑制肿瘤细胞生长。2006年,Theodoropoulou等发现在脑垂体瘤细胞中,SST类似物奥曲肽（octreotide,OCT）是通过Akt途径诱导ZAC的表达而发挥其抗增殖作用的。胃癌细胞系中,SST是否通过Akt途径影响ZAC的表达,导致肿瘤细胞的生长抑制,尚未见报道。本研究应用RT-PCR技术观察胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中SSTR亚型的表达,为选择合适的SST类似物提供依据;应用Westernblot技术观察SST类似物OCT对胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823 Akt、磷酸化Akt（phosphoyrlated Akt,p-Akt）和ZAC的效应,探讨胃癌细胞中SST介导其抗增殖效应的可能机制。材料与方法1.材料胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823（本教研室保存）常规培养于含10%FBS、100KU/L青霉素及100KU/L链霉素的RPMI-1640培养基中,置于37℃、5%的CO2的培养箱中培养。提取胃癌细胞系总RNA用于RT-PCR,检测SSTR mRNA的表达。2.RT-PCR引物由上海生物工程技术有限公司合成。SSTR1:上游,AGCCGGTTGACTATTACGCC,下游,GCTCTCACTTCTACCATTGTC;SSTR2:上游,GGTGAAGTCCTCTGGAATCC,下游,CCATTGCCAGTAGACAGAGC;SSTR3:上游,TCATCTGCCTCTGCTACCTG,下游,GAGCCCAAAGAAGGCAGGCT;SSTR4:上游,CGGCAGTCTTCGTGGTCTAC,下游,GCATCAAG-GCTGGTCACGAC;SSTR5:上游,AACACGCTGGTCATCTACGTGGT,下游,AGACACTGGTGAACTGGTTGAC。采用一步法进行RT-PCR反应,反应条件如下:94℃30 s;60℃,1min;68℃,2min;40个循环。68℃,7 min;4℃,0s。1.5%琼脂糖凝胶电泳观察结果。3.MTT胃癌细胞系BGC-823和SGC7-901分别以终浓度为1nmol/L、10nmol/L、100 nmol/L和1000 nmol/L OCT处理24h。以MTT法检测OCT对胃癌细胞增殖的抑制效应,筛选有效浓度。4.以10 nmol/L OCT处理胃癌细胞系,24h后收集细胞。提取细胞总蛋白用于Western blot检测Akt和p-Akt的水平;提取核蛋白用于Western blot检测ZAC的水平。5.Western blot以化学发光试剂盒显示Western blot信号。β-actin为内参。6.统计学分析采用SPSS10.0统计软件对数据进行处理,以P＜0.05为检验水准。结果1.RT-PCR结果SSTR1～SSTR5的RT-PCR产物分别为334bp、461bp、221bp、247bp和211bp。β-actin的RT-PCR扩增片段长度为385bp。胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901均可检测到SSTR1、SSTR2、SSTR 4和SSTR5 mRNA,未检测到SSTR3 mRNA。2.MTT法结果10 nmol/L OCT对胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901的生长抑制率分别为23.98%和52.96%,与100 nmol/L LOCT的抑制效率19.41%和46.93%相似,故选10nmol/L OCT为有效抑制浓度。3.Western blot结果10 nmol/L OCT处理细胞24h后,Akt表达水平无明显改变（P＞0.05）,p-Akt水平明显降低（P＜0.05）,ZAC的表达量明显升高（P＜0.05）结论1.SSTR3 mRNA在胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中表达缺失。2.OCT处理可抑制胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901 Akt的磷酸化,诱导ZAC的表达。

全文目录


摘要  3-6
Abstract  6-11
论文部分  11-36
  奥曲肽对胃癌细胞Akt及ZAC的效应  11-36
    引言  11-12
    材料与方法  12-23
    结果  23-27
    讨论  27-31
    结论  31-32
    参考文献  32-36
综述部分  36-49
  ZAC家族与肿瘤发生  36-49
    参考文献  43-49
附录部分  49-50
  英文缩略词  49-50
  致谢  50

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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