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米糠抗氧化肽对D-半乳糖致衰小鼠线粒体损伤的影响

作　者: 付岩松
导　师: 樊金娟
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 植物学
关键词: 米糠抗氧化肽衰老模型小鼠线粒体氧化损伤
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本文以米糠为原料,利用D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠模型,研究了米糠抗氧化肽对线粒体损伤的保护及其抗衰老作用,并初步探讨其作用机制。昆明种小鼠60只,随机分成青年对照组、衰老对照组、米糠抗氧化肽低、中、高剂量治疗组,每组12只。衰老对照组、米糠抗氧化肽治疗组每日颈背部皮下注射D-gal 100 mg/(kg-bw),青年对照组注射等量生理盐水；米糠抗氧化肽治疗组每日分别灌胃米糠抗氧化肽100、200、500mg/(kg-bw),两对照组灌胃等量生理盐水,连续6w；期间观察各组小鼠体征表现,每周称量体重一次。利用透射电子显微镜(TEM)观察了肝细胞及其线粒体超微结构；采用紫外分光光度法测定了心、脑、肝线粒体丙二醛(MDA)含量,锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC)及心、脑线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ活性；并通过聚合酶链反应(PCR)技术和光密度扫描检测了该肽对小鼠脑线粒体DNA(mtDNA)缺失突变的影响。结果如下：1.衰老对照组小鼠肝线粒体肿胀明显,有空泡形成或畸形,数量减少且排列紊乱,膜和嵴模糊不清,甚至部分消失等,而米糠抗氧化肽各组小鼠线粒体损伤程度有所改善,500mg/(kg-bw)效果最佳。2.与青年对照组相比,衰老对照组小鼠心、脑、肝线粒体Mn-SOD、GSH-Px、CAT活性,T-AOC活力显著降低(P<0.01),MDA含量显著增加(P<0.01),提示D-gal能诱导氧自由基大量生成,使线粒体脂质过氧化作用增强；而与衰老对照组相比,米糠抗氧化肽各组小鼠线粒体MDA含量显著减少,抗氧化酶活性明显恢复,T-AOC活力显著增高(P<0.05),500mg/(kg·bw)浓度时效果最好。表明米糠抗氧化肽能通过提高线粒体抗氧化能力,清除多余自由基,以抑制D-gal致衰老小鼠的线粒体脂质过氧化损伤。3.与青年对照组相比,衰老对照组小鼠心、脑线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ活性显著下降(P<0.01),脑mtDNA缺失率显著升高；而与衰老对照组相比,中、高剂量米糠抗氧化肽可明显提高衰老小鼠心、脑线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ活性(P<0.01或P<0.05),明显降低脑mtDNA缺失突变(P<0.01),500mg/(kg·bw)剂量效果最优。说明米糠抗氧化肽对D-gal致衰老小鼠呼吸链复合体、mtDNA具有良好的保护作用,为其在分子水平上实现抗衰老提供了可能。随着衰老机体内自由基产生增多,抗氧化酶活性降低,导致小鼠线粒体结构与功能损伤。米糠抗氧化肽可通过清除自由基,改善衰老小鼠细胞线粒体组织学形态,提高Mn-SOD、GSH-Px、CAT、呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ活性及T-AOC活力,降低MDA含量及mtDNA缺失突变,从而发挥其延缓衰老的作用。

全文目录

摘要  11-13
Abstract  13-15
第一章前言  15-33
  1.1 衰老机制的研究进展  15-19
    1.1.1 衰老细胞的结构变化  15-16
    1.1.2 自由基与衰老  16-17
    1.1.3 线粒体与衰老  17-19
  1.2 生物活性肽的抗衰老研究进展  19-24
    1.2.1 生物活性肽的抗衰老能力  19-22
    1.2.2 影响活性肽抗衰老活性的因素  22-24
  1.3 生物活性肽的抗衰老机制  24-29
    1.3.1 抗氧化损伤  24-27
    1.3.2 调节免疫功能  27-28
    1.3.3 防病抗病  28-29
  1.4 米糠肽及其研究前景  29-31
    1.4.1 米糠和米糠蛋白  29
    1.4.2 米糠肽的生理功能  29-31
    1.4.3 展望  31
  1.5 本课题的研究意义  31-33
第二章米糠抗氧化肽对致衰小鼠体征表现及线粒体超微结构的影响  33-44
  2.1 材料  33
  2.2 试剂与仪器  33-34
    2.2.1 主要试剂  33
    2.2.2 主要仪器  33-34
  2.3 试验方法  34-36
    2.3.1 米糠抗氧化肽的制备  34
    2.3.2 米糠抗氧化肽体外抗氧化作用  34-35
    2.3.3 米糠抗氧化肽对致衰小鼠体征表现及线粒体超微结构的影响  35-36
  2.4 结果与分析  36-41
    2.4.1 米糠抗氧化肽体外抗氧化作用  36
    2.4.2 小鼠体征表现变化  36-38
    2.4.3 小鼠肝细胞、线粒体超微结构的变化  38-41
  2.5 讨论  41-42
    2.5.1 D-gal衰老模型的建立  41-42
    2.5.2 米糠抗氧化肽体外抗氧化作用  42
    2.5.3 米糠抗氧化肽对致衰小鼠肝细胞及线粒体超微结构的影响  42
  2.6 结论  42-44
第三章米糠抗氧化肽对致衰小鼠线粒体自由基代谢的影响  44-54
  3.1 材料  44
  3.2 试剂与仪器  44
    3.2.1 主要试剂  44
    3.2.2 主要仪器  44
  3.3 试验方法  44-47
    3.3.1 线粒体的提取及处理  45
    3.3.2 米糠抗氧化肽对致衰小鼠线粒体自由基代谢影响的研究  45-47
    3.3.3 统计学分析  47
  3.4 结果与分析  47-51
    3.4.1 小鼠线粒体Mn-SOD活性的变化  47-48
    3.4.2 小鼠线粒体GSH-Px活性的变化  48-49
    3.4.3 小鼠线粒体CAT活性的变化  49
    3.4.4 小鼠线粒体T-AOC活力的变化  49-50
    3.4.5 小鼠线粒体MDA含量的变化  50-51
  3.5 讨论  51-53
    3.5.1 米糠抗氧化肽对致衰小鼠线粒体主要抗氧化酶活性的影响  51-52
    3.5.2 米糠抗氧化肽对致衰小鼠线粒体T-AOC和MDA含量的影响  52
    3.5.3 米糠抗氧化肽的抗氧化作用机制  52-53
  3.6 结论  53-54
第四章米糠抗氧化肽对致衰小鼠能量代谢及mtDNA缺失的影响  54-65
  4.1 材料  54
  4.2 试剂与仪器  54-55
    4.2.1 主要试剂  54
    4.2.2 主要仪器  54-55
  4.3 试验方法  55-58
    4.3.1 mtDNA的提取  55
    4.3.2 米糠抗氧化肽对致衰小鼠能量代谢的影响  55-56
    4.3.3 米糠抗氧化肽对D-gal致衰小鼠mtDNA缺失的影响  56-57
    4.3.4 统计学分析  57-58
  4.4 结果与分析  58-62
    4.4.1 小鼠线粒体复合体Ⅰ活性的变化  58-59
    4.4.2 小鼠线粒体复合体Ⅱ活性的变化  59
    4.4.3 小鼠线粒体复合体Ⅴ活性的变化  59-60
    4.4.4 小鼠脑mtDNA缺失的变化  60-62
  4.5 讨论  62-64
    4.5.1 米糠抗氧化肽对致衰小鼠线粒体复合体Ⅰ活性的影响  62
    4.5.2 米糠抗氧化肽对致衰小鼠线粒体复合体Ⅱ活性的影响  62-63
    4.5.3 米糠抗氧化肽对致衰小鼠线粒体复合体Ⅴ活性的影响  63-64
    4.5.4 米糠抗氧化肽对致衰小鼠mtDNA缺失的影响  64
  4.6 结论  64-65
第五章米糠抗氧化肽的抗衰老机理探讨  65-66
参考文献  66-73
致谢  73-74
攻读硕士期间发表的论文  74

米糠抗氧化肽对D-半乳糖致衰小鼠线粒体损伤的影响

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