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生长抑素基因工程疫苗相关检测方法的研究

作　者: 张晓娟
导　师: 王林云
学　校: 南京农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 生长抑素基因工程疫苗免疫 ELISA检测抗体
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

本文首先建立了测定激生Ⅰ号苗中HBsAg和SS含量的ELISA定量分析方法。应用本法对激生Ⅰ号苗中HBsAg和SS含量进行分析，可以反映激生Ⅰ号苗在鸡胚上的增殖情况，是苗的一个必要的质量控制指标。试验数据表明，苗中HBsAg与SS的表达量之比约为200-250:1，这与利用RIA进行的表达量分析结果接近。利用特定的渗透休克法提取基因工程表达的产物作为抗原，经一定的处理进行包被，建立了检测激生Ⅰ号苗免疫动物血清中SS抗体的间接ELISA检测技术。另外还建立了测定HBsAg抗体的间接ELISA技术，这两种方法经阻断试验和重复性试验，表明方法的特异性良好、重复性良好。应用这两种方法对激生Ⅰ号苗免疫动物血清进行检测，表明动物产生了一定量的SS抗体及HBsAg抗体。通过试验研究，确定了10~7PFU/头为激生Ⅰ号苗对肉猪的最适免疫剂量。在免疫后2周与10周，10~7组的增重分别比对照组提高16.85％、10.1％，达到显著水平（P＜0.05），到试验结束时，该组增重比对照组提高7.6％，即4.02千克。剂量过大或过小增重效果均不好。另外，饲养管理水平及疾病因子对该疫苗的免疫效果影响很大。利用pET-32大肠杆菌融合表达系统，以硫氧还蛋白（Thioredoxin）为表达载体，已研制成了可用于多次免疫的SS基因工程亚单位疫苗，视插入位点不同分为2株基因工程体，其表达的SS融合蛋白分别为SS-N/X和SS-N/S。将它们分别与弗氏不完全佐剂乳化制成疫苗，免疫BALB/C小鼠，中和动物体内的SS，从而促进动物的生长。结果表明，激生N/X和N/S苗对雌性小鼠的增重效果显著，分别比对照组增重30.54％、36.88％（P＜0.05），而且该苗对二倾l：论义：主长抑凭基因工程疫苗相关检测方法的研究小鼠的增重效果有显著的性别差异，雌性小鼠的增重效果要好于雄性小鼠。本文还利用特异的抗原包被技术，建立了测定激生N八和N书苗兔疫动物血清中SS抗体的ELISA测定方法。试验表明，该法特异性强、重复性好。应用该法对小鼠血清的 SS抗体检测表明，激生N八和 N乃茵免疫动物后，动物产生了一定量的SS抗体，且SS抗体可以维持3－4个月。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
引言  9-10
文献综述  10-25
  1、 SS及其功能  10-14
  2、免疫中和体内的SS，促进动物生长  14-19
  3、 SS免疫研究中血清抗体的水平及其定量测定方法  19-21
  4、 ELISA研究进展  21-25
试验研究  25-71
  第一章激生Ⅰ号苗中HBsAg、SS的ELISA定量分析  25-35
    1、材料  25-26
    2、方法  26-28
    3、结果与分析  28-33
    4、讨论  33-35
  第二章间接ELISA技术检测激生Ⅰ号苗免疫动物血清中SS抗体和HBsAg抗体的研究  35-53
    1、材料  35-36
    2、方法  36-39
    3、结果与分析  39-51
    4、讨论  51-53
  第三章激生Ⅰ号苗对肉猪最适免疫剂量的试验  53-58
    1、材料与方法  53-54
    2、结果与分析  54-55
    3、讨论  55-58
  第四章激生N/X和N/S苗对小鼠的免疫增重试验  58-66
    1、材料与方法  59-60
    2、结果与分析  60-64
    3、讨论  64-66
  第五章激生N/X和N/S苗免疫小鼠血清中SS抗体的ELISA检测  66-71
    1、材料  66-67
    2、方法  67-68
    3、结果与分析  68-70
    4、讨论  70-71
全文总结  71-72
参考文献  72-81
附录  81-83
致谢  83

生长抑素基因工程疫苗相关检测方法的研究

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