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中华绒螯蟹性腺抑制激素基因克隆

作　者: 王颖
导　师: 康现江；赵晓瑜
学　校: 河北大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 中华绒螯蟹性腺抑制激素基因克隆
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 43次
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内容摘要

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)是我国名优淡水养殖业的主要品种,也是我国一种重要的经济蟹类,广泛存在于我国南北各地淡水水域中。而普遍发生的1龄蟹性早熟现象严重影响了其产量,给生产带来巨大损失。大多数学者认为中华绒螯蟹性早熟是外部环境和中华绒螯蟹自身生殖内分泌调控共同作用的结果,尤其是性腺抑制激素对性腺成熟起着重要的调节作用。目前,对甲壳动物的性早熟研究主要有两种方法：一种是对胚胎发育、幼体形态及相关组织学和细胞学的研究；另一种是用分子生物学手段在基因水平研究性腺抑制激素。已经测序的性腺抑制激素基因序列均为虾类,尚未见蟹类的性腺抑制激素基因序列的报道。本实验用基因工程的方法来研究中华绒螯蟹的性腺抑制激素。根据已知物种的性腺抑制激素基因序列,选取保守区设计16对引物,依据密码子偏好性及同源树亲缘关系修正引物。利用TRIzol一步法成功地提取了中华绒螯蟹视上神经节总RNA。经过PCR扩增,最终有一条特异引物能够扩增出DNA片段。克隆后测序,得到三条片段的测序结果。分析结果显示,这三条序列互不相同,且均与五种已知性腺抑制激素基因序列较相似,相似性在38%-43%,接近已知性腺抑制激素基因序列间的相似性(39.50%)。而且通过在Swiss-Prot数据库中的比对发现,这三条片段都具有GIH基因结构上的共同特征：类表皮生长因子区域标记(EGF-like domain signature)、2Fe-2S型铁型铁硫结合区域标记(2Fe-2S ferredoxin-type iron-sulfur binding region signature)和C末端胱氨酸结区域标记(C-terminal cysteine knot domain signature)。初步推测,这三条片段均为类性腺抑制激素基因序列的不同位点的片段。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章绪论  9-19
  1.1 甲壳类动物眼柄神经内分泌系统研究概述  9-13
    1.1.1 眼柄神经内分泌系统的结构及调控作用  9-10
    1.1.2 高血糖激素家族研究进展  10-13
  1.2 中华绒螯蟹及其性早熟现象  13-18
    1.2.1 中华绒螯蟹  13
    1.2.2 中华绒螯蟹性早熟的相关外因影响及内分泌调控  13-16
    1.2.3 中华绒螯蟹视上神经节与性早熟  16-17
    1.2.4 中华绒螯蟹高血糖激素家族研究进展  17-18
  1.3 研究目的和意义  18-19
第2章实验材料与方法  19-27
  2.1 实验材料与试剂  19-20
    2.1.1 材料  19
    2.1.2 主要试剂  19
    2.1.3 主要实验仪器  19-20
    2.1.4 常用试剂和培养基配方  20
  2.2 实验方法  20-27
    2.2.1 性腺抑制激素基因DNA片段的制备  20-25
    2.2.2 性腺抑制激素基因DNA片段的克隆  25-26
    2.2.3 测序结果分析  26-27
第3章实验结果与讨论  27-49
  3.1 性腺抑制激素基因DNA片段的制备  27-31
    3.1.1 引物设计  27-28
    3.1.2 解剖中华绒螯蟹视上神经节  28
    3.1.3 提取中华绒螯蟹视上神经节总RNA  28-29
    3.1.4 RT-PCR扩增性腺抑制激素基因DNA片段  29-30
    3.1.5 PCR产物回收  30-31
  3.2 性腺抑制激素基因DNA片段的克隆  31-33
    3.2.1 蓝白斑筛选阳性克隆  31-32
    3.2.2 菌落PCR鉴定  32-33
  3.3 测序结果分析  33-49
    3.3.1 测序结果  33-39
    3.3.2 与已知基因序列进行比对  39-44
    3.3.3 比对结果分析  44-49
结论  49-50
参考文献  50-55
致谢  55

中华绒螯蟹性腺抑制激素基因克隆

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