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粪鬼伞菌丝体的保藏及生物活性研究

作　者: 田文莹
导　师: 邱芳萍
学　校: 长春工业大学
专　业: 有机化学
关键词: 粪鬼伞菌种保藏抑菌活性多糖提取抗肿瘤
分类号: TQ920.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

粪鬼伞(Coprinus sterqulinus Fr.)属担子菌亚门,鬼伞属。可食用药用,助消化、益肠胃、化痰理气,并医治无名肿毒和其它疮痈,分布于我国河北、江苏、台湾、广西、云南等地区,而且具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等多种生物活性,是当今新药研究热点之一。从植物中寻找生物活性物质是目前研制创新型药物的重要途径之一。本实验旨在对粪鬼伞保藏方法和生物活性进行探讨,并选取常规肿瘤细胞进行初步体外的抗肿瘤活性研究,为粪鬼伞的药用开发探路。本文以粪鬼伞菌丝体为原料,对粪鬼伞菌种的实验室保藏方法以及生物活性进行了研究。根据粪鬼伞种属特点,采用了定期移植保藏法、液体石蜡封存法、土壤保藏法、低温冷冻保藏法、液氮冷冻保藏法等五种常用的菌种保藏方法进行对比研究,选用菌种复培后的生物量、培养液的碳源、氮源利用率等三项指标作为菌种活性对比的评价参数,筛选出最适合该菌种的保藏方法为定期移植保藏法。用微波辅助提取技术从粪鬼伞菌丝体干粉中提取粪鬼伞多糖。在单因素试验的基础上,依据响应面分析法,研究了微波功率、提取时间和料液比对粪鬼伞多糖提取率的影响,确定微波提取粪鬼伞多糖的最佳工艺参数为：微波功率637W、提取时间3min、料液比为1：23,粪鬼伞多糖的提取率为14.39%。在此基础上,通过对粪鬼伞提取物抑菌活性和粪鬼伞提取物抗肿瘤作用两个方面,对粪鬼伞生物活性进行了初步研究。选用肉汤常量稀释法确定粪鬼伞粗提物及多糖对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、埃希氏大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌5种受试菌进行体外抑菌试验,测定最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,除对白色念珠菌没有抑制作用外,粪鬼伞粗提物及多糖对受试细菌均有不同程度的抑菌效果,其中对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、埃希氏大肠杆菌、铜绿假单胞菌的MIC分别为32mg/ml、16mg/ml、16mg/ml、32mg/ml和5.57mg/ml、2.875mg/ml、1.4375mg/ml、14.375mg/ml。粪鬼伞粗提物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、埃希氏大肠杆菌、铜绿假单胞菌4种菌均属于中度敏感。多糖对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、埃希氏大肠杆菌3种菌属于高度敏感,对铜绿假单胞菌属于中度敏感。采用最大给药量方法检测粪鬼伞粗提物急性毒性。小鼠行为活动及体重增长均正常,无异常反应发生,说明粪鬼伞粗提物毒性甚小。荷瘤小鼠灌胃给药粪鬼伞粗提物及多糖,对小鼠体内S180实体瘤的生长有较小的抑制作用；对小鼠脾脏、胸腺免疫器官脏器指数亦无明显影响。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-9
第一章绪论  9-21
  1.1 粪鬼伞研究现状  9-13
  1.2 真菌常用保藏方法  13-16
  1.3 植物活性物质的提取方法  16-18
  1.4 天然抑菌物质抑菌效果的微生物测定法  18-19
  1.5 真菌抗肿瘤活性研究现状  19-21
第二章粪鬼伞菌种保藏方法的筛选  21-25
  2.1 材料、试剂与仪器  21
  2.2 实验方法  21-22
  2.3 结果与分析  22-24
  2.4 结论  24-25
第三章粪鬼伞提取物抑菌活性的研究  25-30
  3.1 材料、试剂与仪器  25
  3.2 实验方法  25-26
  3.3 结果与分析  26-29
  3.4 结论  29-30
第四章微波萃取粪鬼伞抑菌活性物质(多糖)的工艺研究  30-36
  4.1 材料、试剂与仪器  30
  4.2 实验方法  30
  4.3 结果与分析  30-35
  4.4 结论  35-36
第五章粪鬼伞提取物抗肿瘤活性初步研究  36-38
  5.1 材料、试剂与仪器  36
  5.2 实验方法  36-37
  5.3 结果与分析  37
  5.4 结论  37-38
结论  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-43
攻读硕士学位期间研究成果  43-44

粪鬼伞菌丝体的保藏及生物活性研究

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