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临床分离肺炎克雷伯菌产质粒介导AmpC酶的研究

作　者: 郑港森
导　师: 宋秀宇
学　校: 福建医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 肺炎克雷伯菌 质粒 AmpC酶 超广谱β-内酰胺酶
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


目的:对临床分离肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶以及耐药性进行检测,尤其是对肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶的检测,了解本地区肺炎克雷伯菌中AmpC酶耐药基因型的流行情况和耐药性变化,为临床抗感染治疗以及医院感染的监测和控制提供循证医学依据。对肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶检测方法进行评价分析,探讨在临床实验室中建立一种及时、准确的AmpC酶检测方法。方法:收集2006年09月至2007年08月我院临床分离各类标本,经法国BioMerieux VITEK2 Compact全自动细菌鉴定仪进行鉴定为肺炎克雷伯菌共137株(同一患者同类标本分离菌株不重复计入),并同时进行MIC值测定。采用头孢西丁纸片琼脂法(K-B法)进行筛选,以及应用头孢西丁三维试验、CLSI推荐的ESBLs确证试验分别进行AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的表型检测。同时根据苯基代硼酸对AmpC酶的抑制作用采用双纸片协同增效试验检测AmpC酶。应用PCR技术检测ESBLs和AmpC酶耐药基因并对扩增产物进行测序确定其基因型。结果:在137株临床分离肺炎克雷伯菌中,经头孢西丁纸片琼脂扩散试验筛选,对头孢西丁不敏感的菌株共有22株(抑菌圈直径≤17mm),阳性率为16.1%(22株/137株);ESBLs确证试验阳性菌株共有51株,阳性率为37.2%(51株/137株);头孢西丁三维试验阳性菌株共有11株,阳性率为8.0%(11株/137株);双纸片抑制增效试验中,FOX和FOX/PBA纸片组合阳性菌株18株,阳性率为13.1%(18株/137株),CTT和CTT/PBA纸片组合阳性菌株11株,阳性率为8.0%(11株/137株)。在22株对头孢西丁不敏感的临床分离肺炎克雷伯菌中,多重PCR扩增AmpC酶基因经电泳及凝胶成像分析,扩增阳性菌株有19株,阳性率为13.9%(19株/137株);ESBLs基因PCR扩增结果为TEM型阳性有10株,阳性率为45.5%(10株/22株);SHV型阳性有6株,阳性率为27.3%(6株/22株);CTX-M型有6株,阳性率为27.3%(6株/22株)。其中,有1株同时携带4种β-内酰胺酶耐药基因,有6株同时携带3种β-内酰胺酶耐药基因,有5株同时携带2种β-内酰胺酶耐药基因,携带2种及2种以上共有12株(54.5%),而携带AmpC酶耐药基因的肺炎克雷伯菌同时携带ESBLs耐药基因达63.2%(12株/19株)。AmpC酶基因扩增产物经回收测序,其结果与GenBank数据库对比,均为DHA-1型AmpC酶。头孢西丁三维试验阳性结果与PCR结果符合率为47.4%(9株/19株),双纸片抑制增效试验中,CTT/CTT+PBA纸片组阳性结果与PCR结果符合率为57.9%(11株/19株);FOX/FOX+PBA纸片组阳性结果与PCR结果符合率为94.7%(18株/19株)。根据产ESBLs确认试验和头孢西丁三维试验的检测结果(见表1),对137株肺炎克雷伯菌分成ESBLs(-) AmpC(-)、ESBLs(+) AmpC(-)、ESBLs(-) AmpC(+)和ESBLs(+) AmpC(+) 4种模式。其中,对头孢唑啉、头孢曲松、安曲南、头孢他啶和头孢吡肟的耐药率,ESBLs(+) AmpC(-)和ESBLs(+) AmpC(+)模式均为100%,ESBLs(-) AmpC(+)模式分别为100%、100%、75%、75%和25%。对头孢替坦、氨苄西林/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率,ESBLs(+) AmpC(-)模式分别为0%(0株/51株)、68.2%(30株/44株)和4.5%(2株/44株),ESBLs(-) AmpC(+)模式分别为25.0%(1株/4株)、100%(4株/4株)和50.0%(2株/4株),ESBLs(+) AmpC(+)模式分别为42.9%(3株/7株)、100.0%(7株/7株)和28.6%(2株/7株)。对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星和复方新诺明的耐药率,ESBLs(+)模式分别为43.1%(22株/51株)、39.2%(20株/51株)、33.3%(17株/51株)和47.1%(24株/51株),AmpC(+)模式分别为54.5%(6株/11株)、72.7%(8株/11株)、63.6%(7株/11株)和81.8%(9株/11株)。四种模式对亚胺培南和厄它培南的耐药率最低,均为0%。结论:产AmpC酶的肺炎克雷伯菌耐药谱进一步扩大,而且产酶菌常携带2种或以上的耐药基因,表现出多重耐药性,但仍对亚胺培南敏感。以苯基代硼酸抑制剂为基础的双纸片增效试验作为质粒介导AmpC酶的检测方法,尤其是FOX/FOX+PBA复合纸片值得在临床实验室推广和应用。目前,我院临床分离肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶以DHA-1基因型流行为主。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-7
英文缩略词表  7-8
论文正文  8-49
  前言  8-14
  材料与方法  14-22
    1 材料  14-16
    2 方法  16-22
  结果  22-39
    1 肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的表型检测  22-25
    2 肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的耐药性检测结果  25-29
    3 肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶的基因型检测结果  29-37
    4 肺炎克雷伯菌AmpC 酶检测方法比较结果  37-39
  讨论  39-42
  结论  42-43
  参考文献  43-49
综述  49-56
致谢  56-57
在学期间完成的论文  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 临床医学 > 诊断学 > 实验室诊断 > 微生物学检验
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