学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
真核表达CatSper1用于筛选有效siRNA的体外实验研究
作 者: 梅小琴
导 师: 熊承良
学 校: 华中科技大学
专 业: 妇产科学
关键词: 小鼠 开放读码框 CatSper1基因 重组质粒 siRNA N2a细胞 CatSper1 基因表达
分类号: R346
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 1次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
第一部分小鼠CatSper1基因 的学位论文">CatSper1基因重组质粒的构建和表达目的:获得能表达CatSper1基因开放读码框的质粒,在真核细胞中表达CatSper1 mRNA,以用于筛选有效siRNA。方法:利用已有文献及网络资源进行雄性小鼠CatSper1基因的生物信息学分析,以重组PCR的方法,以小鼠睾丸cDNA为模板扩增CatSper1基因开放读码框,将CatSper1片段插入到载体pEGFP-N1的多克隆位点上,获取pEGFP-N1-CatSper1质粒,并对其进行测序验证。结果:通过重组PCR技术,成功克隆了雄性小鼠CatSper1基因整个开放读码框的cDNA,全长为2061bp。将其插入到载体pEGFP-N1的多克隆位点中,测序证实了克隆和载体构建的正确性。结论:对预测的小鼠CatSper1基因的克隆,将CatSper1片段插入到载体pEGFP的多克隆位点上,成功获取了pEGFP-N1-CatSper1重组质粒。第二部分体外有效siRNA序列的筛选目的:利用化学合成小分子siRNA,干扰小鼠成神经瘤N2a细胞外源CatSper1基因的表达,筛选出抑制效果最佳的siRNA序列。方法:生物信息分析软件和校正结果,获得三条针对雄性小鼠CatSper1的siRNA序列,合成后分别与重组质粒pEGFP-N1-CatSper1共转染到小鼠成神经瘤N2a细胞株中,通过观察EGFP荧光强度、实时定量PCR和Western Blot等方法分析干扰效果,筛选能显著降低N2a细胞中外源性CatSper1表达量的RNAi序列。结果:三条针对CatSper1的siRNA组的mRNA和蛋白表达与空白对照组相比均有下降,其中以靠近3’端的siRNA(1870-CCTTGAAGATGCAGCTTAT-1889)干扰作用最为明显,siRNA3组为最佳干扰序列,与空白对照组比较降低了79%。阴性对照siRNA组未引起CatSper1 mRNA和CatSper1蛋白表达的明显变化。结论:利用真核表达外源性CatSper1,筛选出有效的siRNA,为应用RNAi研究CatSper1功能及用于避孕提供参考。
|
全文目录
中文摘要 5-7 Abstract 7-9 引言 9-14 参考文献 12-14 第一部分 小鼠 CatSper1 基因重组质粒的构建 14-29 材料和方法 14-22 结果 22-25 讨论 25-27 参考文献 27-29 第二部分 体外有效 siRNA 序列的筛选 29-46 材料和方法 29-37 结果 37-41 讨论 41-44 参考文献 44-46 论文创新点小结 46-47 综述 47-57 参考文献 53-57 致谢 57-58
|
相似论文
- 多转录因子组合调控研究,Q78
- BMP通路关键因子在人类牙胚组织中的表达检测,R78
- 基于RNA测序技术的马氏珠母贝珍珠囊转录组及数字基因表达谱分析,Q786
- 乌贼墨—黄芪合剂缓解化疗副作用研究,R285.5
- 调和玉米油对肉仔鸡抗氧化应激、脂质代谢酶及免疫基因表达的影响,S831.5
- N-氨甲酰谷氨酸合成及其生理功能研究,R914
- 水稻硝转运蛋白基因OsNRT1.1a和OsNRT1.1b的功能研究,S511
- 河南和云南烤烟碳氮代谢比较研究,S572
- 鸡Δ~6脂肪酸脱氢酶基因启动子区域多态性及基因时空表达的研究,S831
- 血管生成调节因子对性成熟前小鼠卵泡及其血管发育的影响,S865.13
- 犬细小病毒2型VP2基因在昆虫细胞中的表达及血清抗体间接ELISA检测方法的建立,S852.65
- 千岛湖岛屿社鼠的巢区和领域研究,Q958.1
- β-防御素1基因在小鼠乳腺组织中表达的研究,S852.4
- 基因表达谱数据聚类分析方法比较与大豆疫霉基因的网络构建,S435.651
- 番茄磷转运蛋白基因LePT1和LePT2在水稻中的功能鉴定,S511
- 水稻pib基因内含子1、2对Pib启动子活性影响的转基因分析,S511
- 四川会理烤烟叶片生长发育及物质代谢特性研究,S572
- 甘蓝型油菜线粒体DNA提取及基因表达分析研究,S565.4
- 小麦Na~+/H~+逆转运蛋白TaNHX2的功能验证及功能域分析,S512.1
- 抗倒伏油菜根、茎解剖结构及木质素含量和木质素合成关键基因的表达研究,S565.4
- 蝴蝶兰花序分生组织基因LFY表达载体构建及对蝴蝶兰的遗传转化,S682.31
中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|