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碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制研究

作 者: 汪玥
导 师: 曹文静;孙自镛
学 校: 华中科技大学
专 业: 临床检验诊断学
关键词: 肠杆菌科细菌 碳青霉烯酶 MLST 质粒 外膜孔道蛋白
分类号: R446.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


[目的]研究碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的耐药机制,建立获得性碳青霉烯酶流行监测体系。[方法]收集同济医院2007年1月至2010年6月分离的美洛培南抑菌环直径≤21mm的肠杆菌科细菌,测定抗菌药物敏感性,筛选出碳青霉烯类耐药菌株,进行酶表型和基因型筛查;对整合子插入序列和碳青霉烯酶基因附属结构进行分析;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和Southern印迹杂交方法分析耐药菌质粒;采用多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行分型及分析同源性;采用PCR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)方法对菌株的外膜孔道蛋白进行分析。[结果]收集并证实CRE 11株,主要是肺炎克雷伯菌(7/11)。抗菌药物敏感性试验显示所有菌株对大多数抗菌药物耐药,美洛培南8~64μg/ml,亚胺培南4~64μg/ml,厄他培南4~64μg/ml,对氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性显著不同。PCR检测耐药基因,检出IMP-4阳性菌株6株,KPC-2阳性菌株3株,其中一株肺炎克雷伯菌(Kpn6617)同时携带blaIMP-4和blaKPC-2。整合子插入序列均不含有碳青霉烯酶编码基因。对基因附属结构进行分析,结果显示blaKPC-2基因位于由Tn3转座子和Tn4401部分片段构成转座子上。PFGE显示大多数CRE含有3个或3个以上质粒。SDS-PAGE检测外膜孔道蛋白的表达,结果显示仅Kox656存在外膜孔道蛋白(OmpK35和OmpK36)双缺失。对肺炎克雷伯菌进行MLST分型,Kpn6617和Kpn6099均属于ST476型。通过接合试验证明,Kpn6617中携带blaIMP-4质粒具有转移性。进一步研究发现,不同菌株携带blaKPC-2的质粒具有同源性,而携带blaIMP-4的质粒不完全同源。[结论]我院CRE主要是肺炎克雷伯菌,产生碳青霉烯酶是细菌耐药的主要原因,blaIMP-4是主要的碳青霉烯酶酶型。发现一株罕见的同时携带blaKPC-2和blaIMP-4的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌,属于ST476型,其产生机制可能是由于blaIMP-4编码质粒转移至ST476型产KPC-2酶肺炎克雷伯菌中造成。肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶基因的出现和传播对治疗和感染控制造成巨大威胁,应引起人们的警觉。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
全文缩略词  8-11
引言  11-12
第一部分 碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌耐药机制研究  12-39
  2.1.1 材料与方法  12-26
  2.1.2 结果  26-35
  2.1.3 讨论  35-39
第二部分同时携带blaKPC-2 和blaIMP-4 的肺炎克雷伯菌(ST476)碳青霉烯酶编码基因传播机制研究  39-51
  2.2.1 材料与方法  39-46
  2.2.2 结果  46-49
  2.2.3 讨论  49-51
参考文献  51-56
综述 获得性碳青霉烯酶  56-73
  参考文献  67-73
致谢  73-74
附录1 攻读学位期间发表学术论文目录  74

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中图分类: > 医药、卫生 > 临床医学 > 诊断学 > 实验室诊断 > 微生物学检验
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