学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

中药单体化合物Lariciresinol对树突状细胞功能的调控作用及其机制研究

作　者: 戴先坤
导　师: 于益芝
学　校: 第二军医大学
专　业: 免疫学
关键词: 免疫抑制药 IL-10 p38 MAPK ERK1/2 EAE 免疫抑制
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 69次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

免疫抑制剂具有重要的临床应用价值,广泛应用于器官移植抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗,常见的免疫抑制剂有糖皮质激素、维生素D3、环孢素A、雷帕霉素、它克莫司等。这些免疫抑制剂在临床应用的过程中,在产生治疗效应的同时,也具有一定的副作用,因此,研发新的具有治疗作用的免疫抑制剂意义重大。作为我国传统医学中的瑰宝,中草药对疾病的预防和治疗作用,尤其是对炎症、感染、肿瘤、自身免疫、移植排斥等疾病的预防和治疗作用,主要是通过免疫系统实现的。中药中很可能存在具有免疫抑制作用的成分,发现这些成分并研究其功能具有理论和应用价值。由于树突状细胞(Dendritic cells, DCs)是机体免疫应答中的关键细胞,该类细胞也很可能是免疫抑制剂的主要的靶细胞,因此,以DCs作为靶细胞很可能筛选到具有抑制作用的中药成分。鉴于此,我们课题组与第二军医大学药学院张卫东教授课题组合作,利用基于DCs分化发育和功能成熟的药物筛选平台,从496种中药单体化合物中成功筛选出18类31个有效单体成分。并选择对DCs分化发育抑制率较高,而本身的细胞毒性较小,且能有效促进DCs分泌IL-10的免疫抑制性的丝毛瑞香的提取物Lariciresinol(分子式C20H2106)作为研究对象,深入研究该成分对DCs的调控及其机制；并使用过敏性自身免疫反应性脑脊髓膜炎(EAE)模型研究了其在体内应用的有效性。(一)中药单体化合物Lariciresinol对DCs功能的影响以本身的细胞毒性较小,且能有效促进DCs分泌IL-10的Lariciresinol成分为研究对象,研究了Lariciresinol对DCs的凋亡诱导作用、对DCs吞噬功能、成熟表型、细胞因子分泌、激发同种异体免疫反应和抗原提呈能力的影响。我们以GM-CSF和IL-4诱导小鼠骨髓细胞生成DCs,并使用药物处理第五天的未成熟DCs24小时,再用终浓度为100ng／ml的LPS刺激24小时,检测相应指标。使用FACS检测annexinV和PI的方法确定了16nmol／ml为Lariciresinol对未成熟DCs的无毒性浓度范围。后期的研究发现,Lariciresinol不能影响DCs的吞噬和分泌IL-12P70、TNF-α和TGF-β的能力,却能明显促进抑制性细胞因子IL-10的分泌,并能抑制DCs激发同种异体免疫反应(MLR)和特异性抗原提呈能力。(二)中药单体化合物Lariciresinol促进DCs分泌IL-10的机制研究IL-10是一种重要的具有免疫负调节作用的细胞因子。Lariciresinol是如何促进IL-10分泌的呢?进一步实验发现,Lariciresinol对DCs分泌IL-10的促进具有Lariciresinol浓度梯度依赖性和LPS的浓度梯度依赖性。那么,促进的信号通路如何呢?我们采用Western Blot技术,Lariciresinol处理第五天的未成熟DCs 24小时,再加入终浓度为100ng／ml的LPS,并在第0、15、30和60分钟,裂解细胞,收集蛋白检测ERK1／2、p38和JNK的磷酸化情况,发现Lariciresinol能够明显增强ERK1／2的磷酸化；ERK1／2信号通路抑制剂PD98059能够抑制Lariciresinol对DCs的IL-10分泌促进作用,另外,p38信号通路抑制剂SB203580,亦能抑制Lariciresinol促进的IL-10分泌作用。由此,证明了Lariciresinol通过ERK1／2信号通路促进DCsIL-10的分泌,而对P38信号可能具有基础性的活化作用。(三)中药单体化合物Lariciresinol处理的DCs过继转移和Lariciresinol体内注射均能抑制自身免疫病的发生既然,Lariciresinol可以明显促进DCs分泌IL-10的能力,并能部分抑制DCs的成熟和抗原提呈能力,那么,Lariciresinol:处理的DCs能否通过诱导免疫耐受而抑制自身免疫病的发生呢?Lariciresinol直接体内注射,又如何呢?本部分研究中,我们通过小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,对其抑制作用进行了研究。以MOG35-55多肽作为抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素,成功地建立C57BL／6小鼠的EAE模型。其中抗原肽诱导建立的EAE组小鼠发病率达到95%,平均临床打分为3.16±0.79,并且该EAE模型为复发-缓解型,在疾病过程中具有间歇期和不同程度的恢复。随后我们观察了Lariciresinol处理的DCs对EAE诱导的保护效果。取培养至第五天的骨髓细胞来源的未成熟树突状细胞,8nmol/ml Lariciresinol处理24小时,用LPS刺激活化18小时后负载髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG35-55抗原肽,通过腹腔注射免疫正常C57BL／6小鼠,免疫后第二天在各组小鼠中诱导EAE。我们发现与对照组小鼠相比,Lariciresinol处理的DCs组小鼠的发病时间明显推迟；发病率也明显下降；此外,与对照组比较,临床神经功能评分也有所改善。以上结果都显示,Lariciresinol:处理的DCs能使EAE诱导的发病时间推迟,降低小鼠的发病几率,改善小鼠的临床症状,对MOG35-55抗原肽诱导的EAE具有保护作用。为了进一步从体内验证Lariciresinol的直接作用,我们腹腔内直接注射Lariciresinol一周后,直接诱导EAE发病,结果发现Lariciresinol.直接注射对EAE的抑制作用更明显。综上所述,我们对Lariciresinol对DCs免疫功能的调节及其机制进行了研究。发现Lariciresinol通过ERK1／2和P38 MAPK信号途径促进LPS刺激的DCs的IL-10分泌。Lariciresinol处理的DCs过继转移及Lariciresinol直接体内注射都具有一定的免疫抑制功能。

全文目录

中文摘要  5-8
Abstract  8-11
缩略词表  11-12
前言  12-14
第一部分中药单体化合物Lariciresinol对树突状细胞功能的影响  14-25
  一、材料和方法  14-17
  二、结果  17-23
  三、讨论  23-25
第二部分中药单体化合物Lariciresinol促进树突状细胞分泌IL10的机制研究  25-31
  一、材料和方法  25-27
  二、结果  27-30
  三.讨论  30-31
第三部分中药单体化合物Lariciresinol对自身免疫病的抑制作用研究  31-40
  一、材料与方法  31-33
  二、结果  33-38
  三、讨论  38-40
小结  40-41
参考文献  41-43
靶向DCs的自身免疫病免疫治疗研究进展(文献综述)  43-53
致谢  53-54

中药单体化合物Lariciresinol对树突状细胞功能的调控作用及其机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文