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实时荧光定量RT-PCR检测外周血中Metadherin基因及与乳腺癌微转移的相关性研究

作　者: 李兵
导　师: 谢晓冬
学　校: 大连医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 乳腺癌 MTDH基因 FQ RT-PCR 肿瘤转移循环肿瘤细胞
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 259次
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内容摘要

研究背景和目的：乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤及死因之一,全球每年新增约120万乳腺癌患者,每年约25万人死于乳腺癌。近几年随着生活方式的西化,我国乳腺癌的发病率有明显上升的趋势,在城市中乳腺癌已成为女性最常见的肿瘤,仅次于肺癌,更重要的是乳腺癌的死亡率在女性恶性肿瘤死亡率中居第一位,而转移是导致乳腺癌患者死亡的最主要原因。目前认为术后发生转移的主要原因之一是术前未检出的微小转移灶或循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells,CTC)已进入血液,因此寻找一种标志肿瘤早期转移的特异性指标,对早期发现处于亚临床阶段的微转移癌具有重要的临床价值,为进一步探索乳腺癌发生侵袭转移的相关机制、寻找新的治疗方法、提高乳腺癌的治疗效果、改善乳腺癌的生存率甚为重要。转移黏附基因(Metadherin, MTDH)是参与肿瘤侵袭转移的重要基因,编码基因位于8q22,又称Astrocyte Elevated Gene-1(AEG-1)基因,多项研究表明MTDH基因的表达调控与肿瘤侵袭和转移、化疗抵抗、肿瘤血管生成和衰老有关。本研究应用实时荧光定量RT-PCR技术检测乳腺癌患者外周血中MTDH基因的表达水平,分析其与临床病理特征之间的关系和临床意义,探讨MTDH基因是否可以作为乳腺癌预后的预测指标。方法：1、应用离心柱法提取71例乳腺癌患者的外周血中总RNA,将其反转录为cDNA,以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real time quantitative RT-PCR)方法检测MTDH mRNA在乳腺癌患者中的表达情况,研究其与乳腺癌的预后指标及肿瘤增殖相关因子(PCNA、ki67)进行比较,探讨其与乳腺癌预后指标和肿瘤增殖侵袭转移的关系；2、对部分乳腺癌患者(33例)进行跟踪检测,比较化疗前后MTDH基因的表达情况是否有变化；3、对入选的71例乳腺癌患者进行治疗后的随访,研究分析MTDH基因的表达与患者生存情况的相关性。结果：1、实时荧光定量RT-PCR结果显示MTDH基因在乳腺癌等实体瘤患者外周血中均有一定量的表达,而在乳腺纤维瘤患者和健康志愿者中未见阳性表达；2、在71例乳腺癌患者中有61例(81.3%)的患者有MTDH基因因的阳性表达,其中47.5%(29/61)的患者外周血中MTDH基因高水平表达；3、乳腺癌患者外周血中MTDH基因的表达量与淋巴结转移呈正相关,其中淋巴结转移组(1≤LNM≤3)的MTDH表达量约为淋巴结未转移组的1.548倍；淋巴结转移组(LNM>3)的MTDH表达量约为淋巴结转移组(1≤LNM≤3)的2.085倍,约为淋巴结未转移组的3.227倍；4、乳腺癌患者外周血中MTDH基因的表达量在临床分期各组之间存在差异(P<0.05),其中Ⅳ期患者的MTDH基因表达量是Ⅰ期患者的6.774倍,是Ⅱ期的3.387倍,Ⅲ期患者的MTDH基因表达量是Ⅰ期患者的4.563倍；5、乳腺癌患者外周血MTDH基因表达量与患者年龄、ER、PR及HER-2无关(P值分别为0.784、0.164、0.154、0.577,P<0.05)；6、乳腺癌患者外周血MTDH基因表达分别与肿瘤增殖相关因子PCNA、Ki67无关(P值分别为0.093、0.110),而与这两个因子均有阳性表达的患者呈正相关(P值为0.040),提示MTDH基因表达与在肿瘤侵袭转移过程中具有重要作用；7、经辅助化疗2-3周期后对部分MTDH基因阳性的患者再次检测发现有14例患者的MTDH基因转为阴性,转阴率60.9%(14／23),说明化疗可以明显降低基因的表达水平。结论：1、在乳腺癌、肺癌等实体瘤患者的外周血中检测出MTDH基因时,提示循环肿瘤细胞进入血液,表明血中可能存在微小转移,因此MTDH基因有望成为判定肿瘤早期转移的标志物；2、在乳腺癌患者外周血中MTDH基因定量表达与与乳腺癌临床病理特征的关系研究中发现,MTDH基因定量表达与淋巴结转移情况和临床分期相关呈正相关,而MTDH基因定量表达与患者生存时间呈负相关；3、辅助化疗前后乳腺癌患者外周血中的MTDH基因的定量表达明显变化,并发现MTDH基因高表达的乳腺癌病人其预后不佳,生存期较短。总之,乳腺癌患者外周血中MTDH基因的表达水平与不良预后因素有密切关系,可以作为一个独立的预测预后的肿瘤标志物。

全文目录

一、摘要  5-11
  (一) 中文摘要  5-7
  (二) 英文摘要  7-11
二、文献综述  11-25
  (一) 综述  11-22
  (二) 参考文献  22-25
三、正文  25-56
  (一) 前言  25-27
  (二) 材料和方法  27-33
  (三) 结果  33-42
  (四) 讨论  42-51
  (五) 结论  51-52
  (六) 参考文献  52-56
四、附录  56-57
五、致谢  57-58

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