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纤维细胞在大鼠多柔比星慢性肾损害模型肾纤维化过程中的作用以及雷帕霉素对其的影响

作　者: 王显
导　师: 张伯科
学　校: 安徽医科大学
专　业: 内科学
关键词: 多柔比星肾纤维化纤维细胞 CCR7 雷帕霉素
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景与目的肾纤维化是各种病因所致的慢性肾损伤走向终末期肾脏病(End stage renal disease, ESRD)的共同途径,以肾小球硬化及肾小管间质纤维化为主要病理特征,目前研究证实其发生和发展与成纤维细胞和肌成纤维细胞关系密切,而作为这两种细胞的循环前体细胞的纤维细胞(fibrocyte)近来成为研究焦点。阻断纤维细胞趋化、迁移及转分化可能能有效地延缓肾纤维化进展。雷帕霉素(rapamycin,RAPA)是一种新型、强效免疫抑制剂,具有较强的抗炎、抗病毒、抗细胞增殖以及血管保护作用。研究表明RAPA在多个动物肾病模型中具有明显的抗肾纤维化作用。本实验以大鼠多柔比星肾损害模型为研究对象,观察纤维细胞的组织定位以及CCR7、CD45的动态变化,进而探讨纤维细胞在肾纤维化的发生发展中可能的作用,同时观察RAPA干预治疗对纤维细胞相关因子的影响,来进一步探讨其抗肾纤维化作用的可能机制。方法通过两次给予大鼠尾静脉注射多柔比星制备多柔比星肾损害大鼠模型。雄性SD大鼠62只随机分为:正常对照组(A组,n=20)、模型组(B组,n=32)、RAPA治疗组(C组,n=10)。实验开始第1、2周第1天,B、C组分别重复给予多柔比星(4 mg/kg)尾静脉注射,对照组给予等量生理盐水,自首次注射多柔比星之日起,于第2周末给予C组大鼠RAPA1.5 mg/(kg·d)灌胃;A、B组同时给予等量溶媒。分别于首次注射多柔比星后的第4、7、10、13周末收集A、B组的血、尿及肾组织标本,第7周末收集C组的血、尿及肾组织标本。全自动生化仪测定血清甘油三脂、总胆固醇和白蛋白;BCA法检测24 h尿蛋白排泄率;Masson染色,光镜下观察肾脏组织形态学变化,并使用肾小球硬化指数(glomerulosclerosis index,GSI)和肾小管间质损伤指数(tubulointerstitial index,TII)评估肾脏损害程度;免疫组化观察纤维细胞并对其进行组织定位,同时检测CD45、CCR7蛋白表达。结果1.各组大鼠血甘油三酯、总胆固醇及血清白蛋白水平变化B组与A组相比第7周末,血甘油三酯水平升高(2.57±1.19 vs 0.76±0.11,P<0.01)、血总胆固醇水平升高(6.79±1.47 vs 1.29±0.27,P<0.01)显著升高,血清白蛋白水平明显降低(21.41±2.11vs 34.64±0.96, P<0.01)。2.各组大鼠24 h尿蛋白排泄率的变化B组与A组相比第7周末,24 h尿蛋白排出率明显增加(568±102 vs 21±6,P<0.01),且随实验时间呈逐渐上升趋势;C组低于同时相B组(P<0.01)。3.各组大鼠肾脏病理形态学改变光镜下观察,B组肾小球系膜基质明显增多,肾小管多灶性萎缩和扩张,管腔内可见蛋白管型,并随时间延长逐渐加重。GSI及TII随时间延长逐渐升高(P<0.05)。与B组相比较,C组肾小球的硬化和小管间质纤维化均明显减轻(P<0.01)。4.纤维细胞的观察B组第7周末大鼠肾组织的连续切片上检测到肾间质中出现CD45、Ⅰ型胶原双阳性细胞,呈圆形、椭圆形或不规则形态,多分布于肾皮质和皮髓交界区的血管周围,肾小球周围和肾小管间质中也有少量出现。5.各组大鼠CD45蛋白表达的变化免疫组化观察到,B组肾间质中CD45阳性细胞第4周末出现,第7周末数量达到顶点,后逐渐减少(P<0.01)。与B组相比,C组中相同时相CD45阳性细胞数量显著降低(P<0.01)。6.各组大鼠CCR7蛋白表达的变化免疫组化观察到,B组肾间质中CCR7阳性细胞在第4周末出现,在第7周数量达到顶点,后逐渐减少(P<0.01)。与B组相比,C组中相同时相CCR7阳性细胞数量显著降低(P<0.01)。结论纤维细胞可能参与肾纤维化过程,早中期发挥作用,其由外周血迁移到组织可能与CCL21/CCR7信号传递通路有关。RAPA在大鼠慢性肾纤维化进展中具有一定的肾保护作用,可能与降低CCR7蛋白的表达来抑制循环中纤维细胞向局部肾组织迁移相关。

全文目录

英文缩略词  7-8
中文摘要  8-10
英文摘要  10-13
正文  13-39
  1 前言  13-14
  2 材料与方法  14-25
    2.1 材料  14-15
      2.1.1 动物  14
      2.1.2 药物  14
      2.1.3 试剂  14-15
      2.1.4 仪器与设备  15
    2.2 方法  15-25
      2.2.1 建立多柔比星肾病大鼠模型  15
      2.2.2 动物分组及处理  15-16
      2.2.3 标本收集  16
      2.2.4 血生化指标测定  16
      2.2.5 24 h 尿蛋白排泄率的测定  16-17
      2.2.6 肾组织病理形态学分析  17-19
      2.2.7 肾组织中纤维细胞的检测  19-22
      2.2.8 肾组织中 CD45 和 CCR7 蛋白表达测定  22-24
      2.2.9 统计学处理  24-25
  3 结果  25-33
    3.1 模型组血清白蛋白、甘油三酯和总胆固醇水平的测定  25
    3.2 各组大鼠24 h 尿蛋白排泄率的测定  25-26
    3.3 各组大鼠肾脏病理形态学改变  26-28
    3.4 纤维细胞的形态和组织定位  28
    3.5 各组 CD45 蛋白表达的变化  28
    3.6 各组 CCR7 蛋白表达的变化  28-30
    附图  30-33
  4 讨论  33-39
    4.1 纤维细胞对组织损伤的应答以及可能的机制  34-35
    4.2 纤维细胞与肾纤维化  35-36
    4.3 纤维细胞在防治慢性肾纤维化中的意义  36-37
    4.4 RAPA 的药理学作用及对纤维细胞可能存在的影响  37-39
      4.4.1 RAPA 的药理学作用  37
      4.4.2 RAPA 对纤维细胞可能存在的影响  37-39
        4.4.2.1 RAPA 在慢性肾脏病中的作用  38
        4.4.2.2 RAPA 对纤维细胞可能的影响及其机制  38-39
  5 结论  39
参考文献  39-44
附说明  44-45
附录  45-46
致谢  46-47
综述  47-56

纤维细胞在大鼠多柔比星慢性肾损害模型肾纤维化过程中的作用以及雷帕霉素对其的影响

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