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不孕小鼠模型的构建及Oocyte-G1基因沉默小鼠模型的表型分析

作　者: 杨韫赜
导　师: 吴
学　校: 上海交通大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: Oocyte-G1 分子马达驱动蛋白基因沉默生殖发育
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

生物体最基本的特征,便是其动态性。在生物体的发生发育中,涉及到一系列的动态调控过程,使得生物体能够发挥正常的生理功能,维持生命延续。分子马达蛋白便是这样一类动态蛋白,其通过高效耦合生物能与机械能,以分子运动的形式,发挥着生理调控的功能。本文研究的驱动蛋白 Oocyte-G1是分子马达蛋白中的一种。Oocyte-G1首先由我们实验室克隆得到。之前,我们实验室对其进行了初步的体内和体外的分析。本实验通过筛选和鉴定Oocyte-G1基因沉默小鼠模型,并对其产生的异常表型进行分析,来深入研究这一重要驱动蛋白分子在生物体中发挥的作用。结果显示,Oocyte-G1基因沉默小鼠大多①青春期时致死;②体型瘦小;③睾丸萎缩,生精小管无腔体,精子发生出现异常,多现粗线期精母细胞;④卵泡发育也出现迟缓,部分卵母细胞形态异常;⑤在脑中,海马齿状回区域颗粒细胞层出现中断;⑥肺、肾部未见影响。Oocyte-G1基因沉默小鼠模型的建立,使我们更深入地了解了这一驱动蛋白在发育过程中发挥的重要功能。这对于阐明这一新驱动蛋白在生理环境下的作用机理、作用方式,认识其在生物体内的调控作用提供了重要的实验依据。这一研究,将加深我们对于驱动蛋白以及分子马达的认识,并为相关不孕不育疾病的治疗,相关靶向药物的开发以及人造分子马达的研究提供有益的启示。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-10
第一章引言  10-11
第二章研究背景  11-34
  2.1 分子马达和驱动蛋白  11-25
    2.1.1 分子马达（Molecular Motor）  11-12
    2.1.2 驱动蛋白超家族（Kinesin Superfamily Proteins, Kif）  12-22
    2.1.3 Kinesin-8 家族  22-24
    2.1.4 Kif19a 与Oocyte-G1  24-25
  2.2 哺乳动物生殖细胞发生与发育  25-34
    2.2.1 精子发生（spermatogenesis）  25-30
    2.2.2 卵子发生（oogenesis）  30-34
第三章实验材料与方法  34-45
  3.1 实验仪器和及试剂  34
  3.2 实验动物  34
  3.3 实验方法  34-45
    3.3.1 不孕小鼠模型构建  34
    3.3.2 小鼠尾中提取基因组DNA  34-35
    3.3.3 PCR 筛选Oocyte-G1 基因沉默小鼠  35-38
    3.3.4 Western Blot 检测各个器官中Oocyte-G1 表达水平  38-42
    3.3.5 Oocyte-G1 基因沉默小鼠组织的包埋、切片以及形态学观察  42-45
第四章实验结果  45-55
  4.1 受体不孕小鼠模型建立与FGSCs 体外移植  45-46
  4.2 PCR 筛选Oocyte-G1 基因沉默小鼠  46-47
  4.3 Western Blot 检测基因沉默小鼠中Oocyte-G1 表达水平  47-48
  4.4 Oocyte-G1 基因沉默小鼠的表型分析  48-55
    4.4.1 Oocyte-G1 基因沉默导致小鼠表型变化  48-50
    4.4.2 Oocyte-G1 基因沉默影响小鼠精子发生  50-51
    4.4.3 Oocyte-G1 基因沉默影响小鼠卵泡发育  51-53
    4.4.4 Oocyte-G1 基因沉默导致小鼠齿状回异常  53
    4.4.5 Oocyte-G1 基因沉默未对肺、肾产生影响  53-55
第五章实验讨论  55-63
  5.1 Oocyte-G1 基因沉默小鼠模型  55-58
    5.1.1 Oocyte-G1 基因沉默小鼠模型的构建  55
    5.1.2 Oocyte-G1 基因与表型变化  55-58
  5.2 Oocyte-G1 与Kif18  58-59
  5.3 Oocyte-G1 的分子机制  59-61
    5.3.1 Oocyte-G1 参与细胞分裂  59
    5.3.2 Oocyte-G1 参与细胞凋亡  59-61
  5.4 Oocyte-G1 的多重生物学功能  61-63
第六章总结与展望  63-65
  6.1 全文总结  63
  6.2 研究展望  63-65
参考文献  65-74
附录Ⅰ英文名称缩写  74-76
附录Ⅱ实验材料与试剂  76-78
附录Ⅲ实验设备与仪器  78-80
致谢  80-82

不孕小鼠模型的构建及Oocyte-G1基因沉默小鼠模型的表型分析

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