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靶向Survivin基因的siRNA对结肠癌作用的实验研究
作 者: 文贤慧
导 师: 王晓春
学 校: 中南大学
专 业: 临床检验诊断学
关键词: Survivin 基因沉默 siRNA 细胞生物学特性
分类号: R735.35
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的向结肠癌SW480细胞中导入化学合成的针对Survivin基因的siRNA片段,研究RNA干扰对SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据,同时寻求新的、有效的RNA干扰片段。方法将体外合成的特异性针对人Survivin基因的siRNA序列1、序列2、序列3和对照序列,通过脂质体2000分组转染入SW480细胞中,转染后的24h、48h、72h,应用Western蛋白印迹法检测Survivin蛋白的变化,MTT法及流式细胞技术评价其对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果三条外源性siRNA分别作用于SW480细胞,转染后24h、48h、72h,三组Survivin蛋白的表达均出现下调(P<0.05),在48h时达到顶峰,抑制率分别为66.5%±2.1%、49.6%±2.8%和47.8%+3.1%,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT法显示Survivin基因沉默后,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪结果显示,干扰后SW480的细胞周期发生明显变化,G2/M期细胞减少,凋亡细胞增多(P<0.05)。结论1.脂质体所介导的体外Survivin基因的siRNA片段,能有效地沉默结肠癌细胞的Survivin基因的表达,从而抑制结肠癌细胞的增殖和促进细胞的凋亡,为Survivin基因的siRNA临床治疗结肠癌提供了初步的实验依据。2.针对保守区域所设计的靶向siRNA,干扰效果更为显著。3.本研究结果为裸鼠肿瘤模型提供了良好的干扰序列。
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全文目录
摘要 4-6 ABSTRACT 6-9 中英文词汇简表 9-10 第一章 前言 10-12 1.1 结肠癌 10 1.2 RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术 10-12 第二章 材料与方法 12-20 2.1 材料 12-15 2.1.1 细胞株 12 2.1.2 主要试剂 12-14 2.1.3 主要仪器 14 2.1.4 siRNA合成 14-15 2.2 方法 15-19 2.2.1 细胞复苏 15 2.2.2 细胞培养 15 2.2.3 细胞转染 15-16 2.2.4 Western Blot蛋白印记 16-18 2.2.5 噻唑蓝(MTT)实验 18 2.2.6 流式细胞仪 18-19 2.3 统计学处理 19-20 第三章 结果 20-30 3.1 转染效率 20-21 3.2 Survivin蛋白表达水平检测 21-23 3.3 siRNA对SW480细胞增殖的影响 23 3.4 siRNA对SW480细胞周期和凋亡的影响 23-30 3.4.1 实验分组 24 3.4.2 实验结果 24-30 第四章 讨论 30-37 4.1 Survivin基因与结肠癌 30-33 4.1.1 Survivn基因的结构与功能 30 4.1.2 Survivn基因的作用机制 30-31 4.1.3 Survivn与结肠癌 31-33 4.2 RNA干扰 33-37 4.2.1 RNAi的发现与作用机制 33-34 4.2.2 siRNA的设计、合成与干扰 34-37 第五章 结论 37-38 第六章 参考文献 38-44 第七章 综述 44-53 参考文献 50-53 致谢 53-54 攻读学位期间主要的研究成果 54
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肠肿瘤 > 结肠肿瘤
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