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染料木素对人胃癌细胞BGC-823的实验研究

作　者: 吴丽萍
导　师: 刘艳平
学　校: 中南大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 染料木素胃癌细胞细胞凋亡 COX-2 NF-κB
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:采用人胃癌细胞BGC-823作为体外实验模型,再次验证染料木素（Genistein,Gen）对人胃癌细胞的生长影响,并研究了Gen对肿瘤相关蛋白COX-2及其调控转录因子NF-κB的活性变化,旨在探讨将COX-2作为胃癌防治的一种新型靶点的可行性,并分析其可能的作用途径,有望为将Gen用于胃癌防治提供实验依据。方法:（1）采用形态学观察Gen处理前后细胞的形态学变化。（2）MTT检测Gen对人胃癌细胞BGC-823的生长抑制作用。（3）流式细胞术分析了细胞周期分布。（4）Hoechst染色和流式细胞术分析Gen对细胞的凋亡作用。（5）western blotting检测药物处理前后细胞中COX-2蛋白的表达情况。（6）ELISA法检测转录因子NF-κB与DNA的结合活性。结果:（1）Gen作用后倒置显微镜下观察显示,药物作用组细胞数明显减少,细胞皱缩、变圆、与邻近细胞分离,多为单个分布,其中部分脱离培养板而呈漂浮状。（2）MTT试验结果显示,Gen抑制人胃癌细胞BGC-823的生长,且呈浓度-时间依赖性,72h半数抑制浓度约为100μM,与对照组相比,200μM的Gen抑制率达78.34±3.12%（p＜0.05）。（3）流式细胞术对细胞周期情况进行分析的结果显示,BGC-823细胞经Gen处理后G₀/G₁期细胞明显减少,G₂期细胞明显增加,S期细胞无明显改变,表现出了G₂/M期阻滞;且在不同药物浓度下出现不同程度的凋亡峰。（4）应用Hoechst染色方法进一步检测了药物作用后细胞凋亡情况,与对照组相比,Gen作用后出现不同程度的凋亡细胞,与流式细胞术的凋亡分析结果有较好的一致性。荧光显微镜下,药物组可观察到部分细胞凋亡的表现如细胞皱缩、染色质浓缩、边集、核碎裂等细胞凋亡特征.而阴性对照组所有细胞染色均匀。（5）Gen作用后,BGC-823细胞中COX-2蛋白表达下调,NF-κB与DNA的结合活性也被抑制。（6）NF-κB的抑制剂PDTC不仅能够抑制NF-κB的结合活性,而且能够直接抑制COX-2的表达。结论:Gen可通过诱导细胞凋亡和周期G₂/M阻滞的方式抑制胃癌细胞BGC-823的生长,这与Gen对COX-2和NF-κB的抑制作用有关系,而且Gen对COX-2的抑制可能是通过NF-κB途径实现的。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
英文缩略词表  11-13
第一章前言  13-15
第二章材料和方法  15-26
  2.1 材料  15-19
    2.1.1 细胞株来源  15
    2.1.2 药物  15
    2.1.3 主要试剂  15-19
    2.1.4 主要抗体和试剂盒  19
    2.1.5 主要仪器设备  19
  2.2 方法  19-26
    2.2.1 细胞培养  19-20
    2.2.2 细胞形态学观察  20
    2.2.3 MTT实验  20-21
    2.2.4 Hoechst荧光染色  21
    2.2.5 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡  21
    2.2.6 Western blotting检测COX-2蛋白的表达  21-24
    2.2.7 NF-κB与DNA结合活性的测定  24-25
    2.2.8 统计学分析  25-26
第三章结果  26-34
  3.1 Gen对人胃癌细胞BGC-823的形态学影响  26-27
  3.2 Gen抑制人胃癌细胞BGC-823的增殖  27-28
  3.3 Hoechst染色可见Gen诱导人胃癌细胞BGC-823发生凋亡  28-29
  3.4 流式细胞仪检测到Gen对细胞周期和凋亡的影响  29-32
  3.5 Gen下调人胃癌细胞BGC-823中COX-2蛋白表达  32
  3.6 Gen抑制人胃癌细胞BGC-823中NF-κB与DNA结合力  32-33
  3.7 PDTC对人胃癌细胞BGC-823中COX-2蛋白表达和NF-κB活性的影响  33-34
第四章讨论  34-39
第五章结论  39-40
参考文献  40-45
综述  45-58
致谢  58-59
攻读学位期间所取得的研究成果  59

染料木素对人胃癌细胞BGC-823的实验研究

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