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来源于酸橙的枳实、枳壳品质评价体系研究
作 者: 黄伟
导 师: 刘友平;及元乔
学 校: 成都中医药大学
专 业: 药物化学
关键词: 枳实 枳壳 化学成分 药效作用 品质评价
分类号: R282
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
历版《中国药典》规定枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙C. sinensis Osbeck.的干燥幼果;目前,市场上销售的枳实主流品种为酸橙枳实;枳壳为芸香科植物酸橙C. aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实;枳实5-6月收集自落的果实,枳壳7月果皮尚绿时采收。枳实、枳壳均为酸橙的果实,但却存在不同的临床应用习惯和质量评价标准:首先,传统中医药理论认为枳壳味苦、辛、酸,温,归脾、胃经。具有理气宽中,行滞消胀之功效;枳实味苦、辛,微寒,归脾、胃、大肠经。具有破气消积,化痰除痞之功效;枳实力猛,枳壳力缓;枳实专利低位性气滞,枳壳专利高位性气滞。其次,《中国药典》一部2010年版中以柚皮苷、新橙皮苷作为枳壳的质控指标,辛弗林作为枳实的质控指标。枳实、枳壳二者来源相同,只是采收期不相同,然而两药材的药效功能却不相同,二者的质量评价标准也不相同。本研究将对枳实、枳壳的各大类成分、代表性和指标性成分进行对比分析,对其主要药效作用进行比较研究,探讨枳实、枳壳“一物两用”的科学内涵。以期建立枳实、枳壳品质评价的方法,为其质量控制和临床用药提供现代科学依据。本研究的主要研究内容和结果如下:1.对枳实、枳壳化学成分进行了比较研究1.1黄酮类成分本研究采用HPLC技术,首次建立了同时测定药材中橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素的方法。研究结果表明枳实中总黄酮含量明显高于枳壳,采收期较晚的枳壳中4种苷类成分和总黄酮的含量明显低于采收较早的枳壳。通过对20批样品黄酮类成分含量测定结果的聚类分析表明,以4种黄酮类成分为指标基本可以反映枳实、枳壳药材特征和区分枳实、枳壳。聚类结果还显示自采样品具有独特的性质,这可能与采收后的加工条件有关,市购药材均为炭火烤干,自采样品为低温烘干,加工、的温度对枳实、枳壳的品质影响较大。该实验结果提示枳实、枳壳的传统加工方法有待改进。1.2生物碱类枳实、枳壳中所含的生物碱类主要是辛弗林,辛弗林其化学结构近似麻黄碱,其毒副作用已有学者报道,该毒副作用应该引起重视。通过对20批枳实、枳壳药材样本的测定,测定结果表明:枳实、枳壳中均含有辛弗林,枳实中辛弗林含量整体上高于枳壳;而且该类药材中辛弗林的含量差异较大,枳实中含量高者可达2.06%,含量低者仅为0.12%;枳壳中含量高者可达1.12%,含量低者仅为0.1%,因而在建立该类药材的质量标准时应同时考虑辛弗林的临床疗效和毒副作用。如何保证临床用药安全有效,是否应在该类药材品质评价体系中研究制定辛弗林限量规定有待进一步研究。1.3挥发油本部分采用《中国药典》2010年版一部附录XD挥发油测定法甲法提取枳实和枳壳的挥发油进行GC-MS分析,探索两药在挥发油成分上的差异。分析结果显示,不同产地枳实挥发油成分共检测及鉴定到78个成分,不同产地枳壳挥发油成分共检测并鉴定到54个成分。枳实、枳壳挥发油主成分均为柠檬烯(枳实中柠檬烯相对含量在14.15-42.14%之间,枳壳中柠檬烯相对含量在12.77-44.21%之间),不同产地、不同入药品种、不同采收时间和不同加工方式以及挥发油自身的不稳定性导致各药材在挥发油的组成及含量上均有较大差异。1.4 HPLC指纹图谱本研究采用HPLC技术,首次对枳实、枳壳甲醇提取物的指纹图谱进行比较研究。研究结果表明在标定的枳实、枳壳药材样本提取共用峰生成的标准指纹图谱中,二者都含有黄酮苷类成分芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等成分,且在标准图谱中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷四个色谱峰面积最大,占总色谱峰的60%以上,可以作为枳实的特征峰;枳壳的标准色谱峰中特征峰比枳实多,在枳实特征峰的相同位置处,有2个非共有峰,能够从化学特征图谱将两者区别开来。2.枳实、枳壳对小鼠肠推进和胃排空及对兔离体肠肌作用比较研究枳实、枳壳均为临床常用的理气药,都有宽中下气,消导积滞等功能,只是枳壳作用缓和而枳实作用迅猛。二者的药效功能均与胃肠运动有关,为了更好的验证枳实、枳壳对胃肠运动的作用及其差异,探索其可能的作用差异部位,本部分从整体动物(小鼠胃排空及肠推进实验)、离体器官(兔离体小肠)两层次水平观察枳实、枳壳对胃肠运动的影响。本研究先对枳实和枳壳药材水煎液对小鼠胃排空及肠推进作用进行对比研究,实验结果表明,在不同剂量下,枳实、枳壳均能促进正常小鼠的肠推进;低剂量下枳实促进正常小鼠肠推进的作用强于枳壳;高剂量下枳壳促进正常小鼠肠推的作用强于枳实;此外实验结果显示,除枳实高剂量外,其他给药组均能促进正常小鼠的胃排空。为进一步探索两药在理气作用上的差异部位,以兔离体十二指肠为研究对象,比较枳实、枳壳的水煎液、挥发油及总黄酮部位的作用差异。结果表明,不同部位(水煎液、挥发油、总黄酮)对兔离体十二指肠均呈抑制作用,枳实水煎液,对兔离体小肠的抑制作用强于枳壳,而枳实总黄酮、挥发油对兔离体小肠的抑制作用弱于枳壳总黄酮、挥发油。由各大类成分及水煎液抑制作用的差异推测两药在功效上的差异是多成分综合作用的结果,而不是单一成分作用的结果。现代药理研究也证明枳实、枳壳对胃肠平滑肌呈双相调节作用,既兴奋胃肠,使其蠕动增强,又有降低胃肠平滑肌张力和解痉作用。3.同一植物来源的枳实、枳壳药材的品质评价体系的构建本研究首次全面、系统的以化学成分差异为切入点对相同植物来源的枳实、枳壳药材进行比较研究。结果提示,枳实、枳壳品质评价体系的构建应着眼于两药在黄酮类成分上的差异,以橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷以及辛弗林为评价指标能更全面反应药材特征并体现其专属性;如何保证临床用药安全有效,是否应在该类药材品质评价体系中研究制定辛弗林限量规定有待进一步研究;挥发油因其收环境、品种及自身的不稳定性,不建议纳入品质评价体系;传统晒干或者低温干燥方法所干燥的药材与市售炭火烤干所干燥的药材黄酮类成分差异较大,建议进一步规范枳实、枳壳药材的采收加工。
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全文目录
中文摘要 3-6 Abstract 6-11 1. 前言 11-19 1.1 枳实、枳壳研究进展 11-17 1.1.1 本草考证 11 1.1.2 枳实、枳壳商品药材调查 11-12 1.1.3 枳实、枳壳的采收加工 12 1.1.4 化学成分研究进展 12-14 1.1.5 药理作用 14-16 1.1.6 枳实、枳壳有效成分比较 16-17 1.2 立题依据 17-18 1.3 研究工作内容 18-19 1.3.1 枳实、枳壳HPLC指纹图谱比较研究 18 1.3.2 枳实、枳壳黄酮类成分比较研究 18 1.3.3. 枳实、枳壳生物碱类成分比较研究 18 1.3.4. 枳实、枳壳挥发油GC-MS比较分析 18-19 1.3.5. 枳实、枳壳主要药效比较研究 19 2. 实验部分 19-60 2.1 实验仪器与材料 19-21 2.1.1 实验仪器 19 2.1.2 材料与试剂 19-20 2.1.3 样品的收集 20-21 2.2 枳实、枳壳药材HPLC指纹图谱研究 21-30 2.2.1 枳实、枳壳药材指纹图谱获取方法研究 21-26 2.2.2 枳实、枳壳对照药材指纹图谱的建立 26-30 2.3 黄酮类成分比较研究 30-40 2.3.1 7种黄酮类成分含量比较研究 30-34 2.3.2 总黄酮含量测定 34-37 2.3.3 实验结果分析 37 2.3.4 枳实、枳壳黄酮类成分比较分析 37-39 2.3.5 小结与讨论 39-40 2.4 生物碱类成分比较研究 40-47 2.4.1 辛弗林含量测定 40-43 2.4.2 聚酰胺纯化总生物碱后测定总生物碱含量 43-46 2.4.3 实验结果 46-47 2.4.4 小结与讨论 47 2.5 挥发油GC-MS比较研究 47-55 2.5.1 供试品的制备 48 2.5.2 色谱条件 48 2.5.3 挥发油成分分析 48 2.5.4 检索与比对 48-49 2.5.5 枳实、枳壳挥发油成分比较 49-54 2.5.6 小结与讨论 54-55 2.6 主要药效作用比较研究 55-60 2.6.1 枳实、枳壳对小鼠胃排空、肠推进作用比较 55-57 2.6.2 枳实、枳壳水煎液及各部位对家兔离体肠肌的影响比较 57-60 3. 结论 60-66 3.1 枳实、枳壳商品药材文献分析 61 3.2 枳实、枳壳药材化学成分比较研究 61-63 3.2.1 黄酮类成分 61 3.2.2 生物碱类 61-62 3.2.3 挥发油 62 3.2.4 HPLC指纹图谱 62-63 3.3. 枳实、枳壳采收加工分析 63 3.4 枳实、枳壳主要药效学比较研究 63-64 3.4.1 枳实、枳壳对小鼠肠推进和胃排空作用差异 63-64 3.4.2 枳实、枳壳对兔离体肠肌作用差异 64 3.5 同一植物来源的枳实、枳壳药材品质评价体系的构建 64-66 参考文献 66-68 致谢 68-69 附件一:附图 69-71 附件二 71-72
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药材
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