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P2X_3和CGRP受体在不同胎龄人胚DRG的表达分布

作　者: 吴海平
导　师: 潘爱华
学　校: 中南大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: P2X3 CGRP 人胚脊神经节免疫组织化学染色
分类号: R321
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：观察P2X3和CGRP受体在不同胎龄人胚脊神经节的分布表达规律,探讨P2X3和CGRP受体在神经系统发育中的意义。方法：收集引产死亡30分钟内的人胚胎1 2例,分别是第4、5、6、7、8个月胎龄组,第4、5、8个月胎龄组各2例,第6、7个月胎龄组各3例。解剖获取各组人胚L4脊神经节,4%多聚甲醛后固定,常规酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。石蜡切片厚4μm,运用尼氏染色、免疫组织化学染色的方法,观察P2X3和CGRP受体在第4-8个月胎龄组的人胚脊神经节中的表达分布规律,结合图像分析技术并运用SPSS13.0软件进行单因素方差分析,比较各胎龄组间阳性细胞数目的差异性。结果：在不同胎龄组人胚L4脊神经节神经元尼氏染色后,观察到尼氏小体呈蓝紫色,均匀分布于胞浆内,细胞形态大小正常,随着胎龄的增加,神经元有逐渐增大的趋势。运用免疫荧光双标记方法,用特异标记卫星细胞的谷氨酰胺合成酶抗体GS与P2X3或CGRP受体双标记,检测到P2X3和CGRP受体表达在神经元内。免疫组织化学显示P2X3受体免疫阳性产物呈颗粒状分布于脊神经节的中小型神经元的胞浆和胞膜,呈均质状,较深染,核不着色。P2X3受体在各胎龄组DRG神经元中均有不同程度的表达；其中第8个月胎龄组DRG中有中型神经元出现,且P2X3受体表达呈弱阳性。在第4-8个月胎龄组DRG中P2X3受体免疫阳性细胞数逐渐减少,各胎龄组间比较差异显著(P<0.01)。免疫组织化学显示CGRP受体免疫阳性产物呈颗粒状分布于脊神经节的小型神经元的胞浆和胞膜,呈均质状,较深染,核不着色。在第4-5个月胎龄组的DRG神经元中CGRP受体阳性细胞较少,且呈弱阳性；在第6-8个月胎龄组的DRG神经元中CGRP受体阳性表达逐渐增强,阳性细胞数逐渐增加,各胎龄组间比较差异显著(P<0.01)。结论：P2X3和CGRP受体在人胚DRG的表达和分布随胎龄变化呈现一定变化规律。在人胚DRG,P2X3受体阳性产物分布于中小型神经元,随着胎龄的增加,P2X3受体阳性细胞数逐渐减少。CGRP受体阳性产物分布于小型神经元,随着胎龄的增加,CGRP受体阳性细胞数逐渐增加。上述结果为进一步研究这两种蛋白在神经细胞发育过程中的作用及伤害性刺激传导中的意义提供形态学依据。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
英文缩略词简表  8-11
第一章前言  11-13
第二章材料与方法  13-18
  2.1 实验人胚  13
  2.2 实验试剂及仪器  13-14
  2.3 实验方法  14-18
    2.3.1 实验人胚胎龄确定和分组  14
    2.3.2 人胚灌注固定  14
    2.3.3 取材  14-15
    2.3.4 组织包埋  15
    2.3.5 切片和烤片  15
    2.3.6 脱蜡和水化  15
    2.3.7 抗原修复  15
    2.3.8 免疫荧光染色  15-16
    2.3.9 免疫组织化学染色  16
    2.3.10 尼氏染色  16-17
    2.3.11 数据收集处理和统计学分析  17-18
第三章结果  18-20
  3.1 尼氏染色  18
  3.2 免疫荧光染色  18
    3.2.1 人胚DRG中P2X3受体免疫荧光染色  18
    3.2.2 人胚DRG中CGRP受体免疫荧光染色  18
  3.3 免疫组织化学染色  18-20
    3.3.1 人胚DRG中P2X3受体免疫组织化学染色  18-19
    3.3.2 人胚DRG中CGRP受体免疫组织化学染色  19-20
第四章讨论  20-24
  4.1 P2X3受体在人胚DRG中的表达分布及意义  20-22
  4.2 CGRP受体在人胚DRG中的表达分布及意义  22-24
第五章结论  24-25
第六章图片说明  25-31
参考文献  31-35
综述  35-45
  参考文献  41-45
致谢  45-46
在读期间发表的学术论文及相关成绩  46

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