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大鼠骨髓间充质干细胞包膜下移植对梗阻肾病变影响的初步研究

作　者: 程庆
导　师: 白志明
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 骨髓间充质干细胞可复性单侧输尿管梗阻肾包膜下注射间质纤维化巨噬细胞
分类号: R692.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：培养高纯度骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)并鉴定,完善包膜下移植技术内容,从炎症及纤维化水平两个角度初探间充质干细胞(MSCs)包膜下移植对梗阻肾的安全性和有效性。方法：采用改良贴壁法培养BM-MSCs,观察其贴壁性能,利用流式细胞仪在P2代时测定细胞表型以鉴定。采用V管卡压法建立大鼠可复性单侧输尿管梗阻(R-UUO)模型,从细针、微量注射器以及均匀安排注射点三个方面建立大鼠肾包膜下移植的技术内容。免疫组化检测肾脏抗巨噬细胞单克隆抗体(ED-1)表达水平及位置,Masson染色检测胶原沉积量。使用IPP软件分析ED-1平均光密度,以及Masson阳染区域占整个切片的面积比。根据正态性检验结果,采用单因素方差分析或非参数检验进行组间比较,均以SPSS软件进行数据分析。结果：1.分离所得细胞具典型成纤维样细胞形态,贴壁；细胞表型检测结果为：CD29阳性率99.6%,CD34阴性率98.6%,CD44阳性率68.1%,CD45阳性率99.9%,CD90阳性率94.9%。2.V管卡压法可顺利建立大鼠R-UUO模型,梗阻成功率为98.6%(69/70),复通成功率为81.2%(56/69),总建模成功率为80%(56/70)。3.使用极细针结合微量注射器,均匀安排注射点于肾脏冠状位中切线两侧,可有效进行MSCs的包膜下移植。4.MSCs包膜下移植组和对照组比较,ED-1表达水平在14天时有显著差异,胶原沉积量面积比在各时间点均无显著差异。5.包膜下注射的两组和损伤对照组比较,后者ED-1表达水平低于另外两组,其中在14天时和对照组比较有统计学意义(P<0.05)。在胶原沉积量的比较中无显著差别(P>0.05)。6.随病程变化,损伤对照组内ED-1表达水平一直呈下降趋势,14天组和另外两组比较有统计学意义(P<0.05),穿刺两组内各时间点比较无差异。胶原沉积量在各组内均有下降,其中对照组和损伤对照组差别有显著性(P<0.05)。结论：1.改良贴壁法可分离、培养获得高纯度骨髓间充质干细胞,且方便、易行。2.极细针结合微量注射器,均匀安排注射点是有效的大鼠梗阻肾肾包膜下移植技术方案。3.BM-MSCs包膜下移植在14天时可降低梗阻肾巨噬细胞浸润水平,但不能减轻纤维化。4.包膜下注射在短期内可造成明显的炎性反应加重,但观察期内未有加重纤维化。5.解除梗阻可明显减轻炎性反应及纤维化,梗阻肾应该首先解除梗阻。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
中英文缩写  10-11
第一章大鼠骨髓间充质干细胞的培养、分离和鉴定  11-25
  1.1 引言  11
  1.2 主要试剂与设备  11-13
  1.3 实验方法  13-15
  1.4 结果  15-16
  1.5 讨论  16-19
  1.6 结论  19
  1.7 附图  19-25
第二章大鼠可复性单侧输尿管梗阻模型制备及肾包膜下移植方法的建立  25-40
  2.1 引言  25
  2.2 主要试剂与设备  25-26
  2.3 实验方法  26-29
  2.4 结果  29-30
  2.5 讨论  30-33
  2.6 结论  33
  2.7 附图  33-40
第三章间充质干细胞对肾间质纤维化及巨噬细胞依赖途径的作用研究  40-57
  3.1 引言  40
  3.2 主要试剂和设备  40-41
  3.3 实验方法  41-44
  3.4 结果  44-52
  3.5 讨论  52-56
  3.6 结论  56-57
参考文献  57-61
综述  61-68
  参考文献  65-68
致谢  68-70
攻读硕士学位期间的研究成果  70

大鼠骨髓间充质干细胞包膜下移植对梗阻肾病变影响的初步研究

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