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孕酮对去卵巢小鼠学习记忆功能的长效作用及相关机制研究

作　者: 何璐
导　师: 李云生；任学军
学　校: 天津医科大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 孕酮学习记忆 Y-型迷宫 Morris水迷宫海马乙酰胆碱超氧化物岐化酶丙二醛
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的本研究观察孕酮是否对去卵巢小鼠(雌、孕激素缺失)的学习记忆能力有改善作用,并对海马组织进行相关生化指标的测定和神经元定量观察分析,进而对孕酮、海马组织及学习记忆三者的关系进行研究探讨。方法第一部分:60只雌性昆明小鼠随机等分为5组:假手术对照组(Sham)、去卵巢对照组(OVX)、孕酮低剂量组(LP,50mg/kg)、孕酮中剂量组(MP,100mg/kg)和孕酮高剂量组(HP,200mg/kg),除假手术对照组外,其它各组小鼠行双侧卵巢切除术。术后2周,每隔5天对各组小鼠分别腹腔注射不同剂量孕酮或生理盐水,持续90天。在给药末期,应用Y—型电迷宫测试和Morris水迷宫测试方法,观察小鼠学习记忆功能的变化。第二部分:将各组小鼠断头处死,取出脑组织。对部分小鼠检测海马结构组织的超氧化物岐化酶、丙二醛、乙酰胆碱酯酶的含量及总抗氧化能力水平;其余小鼠取大脑中部脑组织,做石蜡包埋冠状切片,采用Nissle染色方法对海马冠状切片进行染色,显微镜下观察不同组别海马CA1、CA3和DG区的形态结构,并使用MOTIC图象分析系统进行形态计量学分析。结果第一部分:孕酮对各组小鼠学习记忆能力测试结果一、Y—型迷宫逃避反射能力测试与假手术对照组比较,去卵巢对照组在学习的获得和记忆的保持两个阶段都显示逃避反射学习能力显著下降(P＜0.05);与去卵巢对照组比较,孕酮高、中剂量组在记忆保持阶段逃避反射学习能力得到了显著的改善(P＜0.05)。二、Morris水迷宫空间辨别学习能力测试1、定位航行实验:实验测试的第2、3、4、5天各组小鼠的逃避潜伏期迅速下降,在第5天以后趋于平稳。在小鼠逃避潜伏期迅速下降的过程中,孕酮高剂量组和去卵巢对照组比较在第3、5天逃避潜伏期出现了显著的下降(P＜0.05)。从平台所在象限的记忆频度上看,孕酮高剂量组则是在第5、7天的训练测试中较去卵巢组有显著的升高(P＜0.05)。2、空间探索实验:与去卵巢对照组比较,假手术对照组和孕酮高剂量组在Ⅲ象限的运动时间占比显著增高(P＜0.05)。第二部分:孕酮对小鼠海马结构的影响及相关机制分析结果一、生化指标测定结果与假手术对照组比较,其它各组AchE含量均出现显著性降低(P＜0.05),并且孕酮各计量组与去卵巢对照组之间AchE含量无显著差异性(P＞0.05);与去卵巢对照组比较,MDA含量在假手术对照组和孕酮高计量组显著较低(P＜0.05);与去卵巢对照组比较,假手术对照组和孕酮各计量组SOD含量显著较高(P＜0.05);与去卵巢对照组比较,孕酮高计量组和假手术对照组T-AOC显著增高(P＜0.05)。二、海马各亚区的组织形态学观察和计量学分析1、海马各亚区锥体(颗粒)细胞层神经元数目测量结果海马CA1区:与去卵巢对照组比较,孕酮高计量组和假手术对照组单位视野神经元数目显著升高(P＜0.05);海马CA3、DG区未见有显著变化。2、海马各亚区锥体(颗粒)细胞层厚度测量结果与去卵巢对照组比较,假手术对照组和孕酮高计量组海马CA1、DG区锥体细胞层厚度显著较大(P＜0.05);CA3区未见有明显变化。3、海马组织切片Nissle染色形态学观察结果镜下与去卵巢对照组比较,孕酮高计量组CA1、CA2、CA3锥体细胞层和DG区颗粒细胞层的神经元排列规整,分层明显,海马与周围大脑皮质分界清晰;细胞形态相似,着色程度一致,细胞界限清楚,胞浆丰富,胞质内颗粒状尼氏体清晰可见,胞体呈锥体形,较大,核大而圆,位于中央,染色浅,核仁明显。结论雌、孕激素的缺乏会引起成年雌性小鼠学习记忆功能障碍,而长期的孕酮补充治疗可以改善去卵巢小鼠的学习记忆能力。孕酮影响学习记忆能力的机制之一可能是其通过组织抗氧化作用,抵抗海马组织氧自由基所致的脂质过氧化反应,提高组织总抗氧化能力,维持海马组织氧化和抗氧化的平衡状态,从而保证大脑海马正常结构和功能的完整。孕酮能明显影响去卵巢小鼠海马组织各亚区的组织结构形态和锥体(颗粒)细胞层厚度,并对海马CA1区神经元数量有增高作用。

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中文摘要  4-7
ABSTRACT  7-14
前言  14-17
  一、孕酮对中枢神经系统保护作用的研究现状  14-15
  二、学习记忆的一般概念  15
  三、本课题的立论依据  15-17
第一部分孕酮对去卵巢小鼠学习记忆功能的影响  17-29
  一、材料和方法  17-22
  二、结果  22-29
第二部分孕酮对去卵巢小鼠海马组织的影响及相关机制  29-43
  一、材料和方法  29-36
  二、结果  36-43
讨论  43-50
结论  50-51
参考文献  51-55
综述  55-64
致谢  64

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