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脂肪源性神经干细胞移植治疗帕金森病模型鼠

作　者: 高华
导　师: 杨新玲
学　校: 新疆医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 脂肪干细胞神经干细胞细胞移植帕金森病酪氨酸羟化酶
分类号: R742.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：探讨脂肪干细胞(adipose-derived strom cell, ADSCs)诱导分化为神经干细胞(neuralstemcells, NSCs)移植治疗帕金森病(PD)模型鼠的疗效及可能作用机制。方法：1)利用胶原酶消化法体外分离培养ADSCs,流式细胞仪检测第三代ADSCs的表面表型CD44、CD45、CD29的表达。利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),表皮生长因子(EGF)及B27建立神经干细胞培养体系,诱导第三代ADSCs分化为NSCs和神经细胞。观察细胞形态学变化,免疫荧光染色检测诱导的NSCs巢蛋白(nestin),神经元(NF-200)及神经胶质细胞(GFAP)的表达；2)采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)单侧两点毁损法制作PD大鼠模型,阿扑吗啡(APO)诱导旋转实验观察行为学变化,免疫组化法观察模型鼠脑内纹状体区TH(酪氨酸羟化酶)阳性细胞数量变化情况；3)成功的PD大鼠模型随机分为两组,诱导的NSCs移植组(22只),生理盐水组(22只),正常对照组(16只)：细胞移植前48h,加入5-溴-2-脱氧嘧啶(Brdu)进行标记。各组分别在纹状体区注入Brdu标记ADSCs源性的NSCs(1.2×106个/只)和生理盐水(12μl)。在干预前、干预后2周、4周、8周行APO诱导的大鼠旋转实验；脑冰冻切片免疫荧光双标鉴定细胞成活分化情况；8周时,免疫组化染色观察TH阳性细胞数量变化,高效液相色谱法检测脑内DA含量,RT-PCR技术检测移植后大鼠脑内THmRNA的表达。结果：1)细胞检测：①ADSCs的检测：ADSCs成纤维状单层生长：其表面表型CD29(99.00±0.12)%,CD44(95.62±0.68)%,CD45(0.13±0.12)%。②NSCs神经细胞检测：诱导后细胞呈球形并可以增殖,免疫荧光检测可见细胞球nestin阳性表达,加入血清后分化为神经细胞和神经胶质细胞(NF-200和GFAP阳性表达)。2)模型的检测：①100只大鼠中经APO诱导后44只(占44%)持续转向健侧(旋转圈数>7r/min),帕金森病大鼠模型复制成功。注射侧纹状体区TH免疫阳性细胞明显减少；3)干预后检测：①旋转实验：细胞移植治疗2周各组无差异,4周、8周后,NSCs组好于生理盐水组(P<0.05)。②免疫荧光双标检测：8周可见Brdu/nestin、Brdu/NF-200、Brdu/GFAP阳性细胞,未见到Brdu/TH阳性细胞。③RT-PCR显示：NSCs组THmRNA较生理盐水组表达增高。④高效液相色谱法显示脑内DA含量：NSCs组含量有所增加,好于生理盐水组。结论：脂肪源性NSCs可通过上调脑内TH mRNA,增加DA含量,改善PD模型鼠行为学。

脂肪源性神经干细胞移植治疗帕金森病模型鼠

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