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致病性坏死梭杆菌细胞壁溶胶原成分分离纯化及细胞毒性研究

作　者: 王燕
导　师: 陈立志；刘晓颖
学　校: 江苏科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 坏死梭杆菌细胞壁溶胶原成分分离纯化细胞毒性溶胶原活性
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本研究利用DEAE琼脂糖离子交换层析和葡聚糖凝胶G-75凝胶过滤层析技术,从牛源致病性坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum, Fn) FN(A)5株细菌培养物中获得坏死梭杆菌细胞壁溶胶原成分(collagenolytic cell wall component, CCWC)初步纯化产物,在体内和体外对纯化产物的生物化学和生物学特性及细胞毒性进行相关研究。研究内容如下:通过胶原酶试验试剂盒建立坏死梭杆菌CCWC胶原酶活性的体外测定方法;通过离子交换层析和凝胶过滤获得CCWC初步纯化产物;通过凝胶法鲎试剂试验排除CCWC初步纯化产物中内毒素的存在;用小鼠作为实验动物,通过剖检和肝脏组织病理切片证实纯化的CCWC对小鼠具有毒性,研究表明CCWC是Fn感染宿主的重要毒力因子之一;在体外以小鼠肝上皮细胞(NCTC 1 469)和小鼠巨噬细胞(AnA-1)为靶细胞,通过MTS还原试验、扫描电子显微术(SEM)和透射电子显微术(TEM)证实CCWC能通过对宿主细胞的细胞毒性使其细胞活力降低,细胞形态学或表面结构发生改变,细胞膜及细胞器等细胞结构遭到破坏,诱导宿主细胞出现凋亡和坏死。由CCWC初步纯化产物的动物实验结合体外细胞毒性试验,推测CCWC一方面可能诱导宿主内脏组织发生最初的损伤,另一方面通过对免疫细胞的细胞毒性作用实现免疫逃避,增加Fn在感染的起始阶段存活的几率,进而感染宿主形成疾病。本研究为Fn毒力因子作用机制的进一步研究及Fn亚单位疫苗的研制提供了基础数据。

致病性坏死梭杆菌细胞壁溶胶原成分分离纯化及细胞毒性研究

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