学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

Nrf2、HO-1在实验性大鼠脑缺血再灌注模型中的动态表达及氧化苦参碱的神经保护作用

作　者: 李敏
导　师: 张祥建
学　校: 河北医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 脑缺血再灌注 氧化应激 神经保护 Nrf2 HO-1氧化苦参碱
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 299次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的:缺血性脑血管病是常见病、多发病,病死率和致残率均较高。早期溶栓治疗是急性期脑梗死有效的治疗方法。脑缺血再灌注损伤机制包括相互承启、交互作用的数个机制,如兴奋性氨基酸毒性作用、炎症、细胞凋亡等。氧化应激时活性氧增加,氧化应激时可通过激活氧化还原反应敏感的炎症趋化因子和转录因子Nrf2,使组织损伤时炎症反应增加。近年研究显示Kelch-like ECH -associated protein1(Keap1)- Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)/ antioxidant response element (ARE)通路是细胞内重要的抗氧化及细胞毒防御机制之一,Nrf2是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子。通过上调此信号通路可诱导多种抗氧化酶及解毒酶,加速酶促反应,提高谷胱甘肽及超氧化物歧化酶等抗氧化物质的表达水平,清除自由基等氧化物质,维持细胞内的氧化还原水平状态,发挥细胞保护作用。本实验成功建立了大鼠脑缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion/ reperfusion, MCAO/R)模型,测定了不同时间点大鼠脑组织中Nrf2及Ⅱ相酶血红素加氧酶1(heme oxygenase-1, HO-1)的表达水平,以及OMT在脑缺血损伤中的神经保护作用及其对Keap1-Nrf2/ARE通路的上调作用。方法:⑴成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为三组:大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral arteryocclusion/ reperfusion, MCAO/R)生理盐水组(MCAO/R+NS 3 ml/kg)(简称MCAO/R组)、大脑中动脉闭塞/再灌注OMT组(MCAO/R+OMT 120 mg/kg )(简称OMT组)、Sham组,每组按时间分为术后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h 6个亚组。按照改良的拴线法建立大脑中动脉缺血再灌注动物模型。OMT组动物梗死后立即腹腔注射120 mg/kg的氧化苦参碱,以后每天一次。MCAO/R组和Sham组给予等体积生理盐水。术后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h对大鼠进行神经功能评分,评分完毕将动物断头处死,用干湿重法测定脑组织含水量,用免疫组化法检测Nrf2和HO-1的表达。⑵测定蛋白表达:其中用于观测动态表达大鼠,随机分为7组:①MCAO/R 3 h组;②MCAO/R 6 h组;③MCAO/R 12 h组;④MCAO/R 24 h组;⑤MCAO/R 48 h组;⑥MCAO/R 72 h组;⑦Sham组。用于观测OMT疗效大鼠,随机分为3组:①MCAO/R组;②OMT组;③Sham组,均为手术后48 h组。用免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2和HO-1蛋白的表达情况。⑶用于脑梗死体积测定的大鼠,随机分为3组:①MCAO/R组;②OMT组;③S ham组,术后72 h处死用2,3,5三苯基四唑氮红(triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色。结果:1 MCAO/R和OMT组大鼠均出现不同程度的左侧肢体偏瘫。OMT组的神经功能评分低于MCAO/R组(P<0.05)。2 Sham组无梗死灶。与MCAO/R组相比,OMT组梗死体积明显减小(P<0.01)。3 MCAO/R组和OMT组脑组织含水量均在术后6 h开始升高,48 h达高峰,72 h开始下降,与Sham组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。与MCAO/R组相比,OMT组的脑组织含水量明显下降(P<0.05)。4脑缺血6 h后Nrf2核阳性细胞数MCAO/R组和OMT组增多,48 h达高峰,72 h逐渐下降,与Sham组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。OMT组核阳性细胞数明显多于MCAO/R组(P<0.01)。Western blot显示,MCAO/R组与Sham组相比,在各个时间点Nrf2总蛋白的表达没有明显变化(P>0.05);与MCAO/R组及Sham组相比,OMT组在48h时间点Nrf2总蛋白的表达明显增加(P<0.05)。5脑缺血6 h后HO-1的阳性细胞数MCAO/R组和OMT组开始增多,48 h达高峰,72 h逐渐下降,与Sham组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。OMT组较MCAO/R组HO-1表达量明显增加。Western blot显示,MCAO/R组与Sham组相比,在各个时间点HO-1总蛋白的表达与免疫组化的变化规律相似(P<0.01);与MCAO/R组、Sham组相比,OMT组在48h时间点HO-1总蛋白的表达明显增加(P<0.01)。结论:Nrf2及HO-1在大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注后的脑组织中早期即有表达增高。氧化苦参碱干预后,缺血性脑组织脑含水量降低,梗死体积减小,神经功能症状缺损评分降低,并上调了Nrf2及HO-1的表达水平,氧化苦参碱对缺血性脑组织有脑保护作用,推测Keap1-Nrf2/ARE信号通路参与了氧化苦参碱的脑保护作用。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
前言  11-13
材料与方法  13-24
结果  24-28
附图  28-34
附表  34-36
讨论  36-50
结论  50
参考文献  50-58
致谢  58-59
个人简历  59

相似论文

  1. 调和玉米油对肉仔鸡抗氧化应激、脂质代谢酶及免疫基因表达的影响,S831.5
  2. 三氯乙烯致敏豚鼠肾损伤及其氧化应激机制的研究,R363
  3. β-酪啡肽7和酪蛋白水解肽对糖尿病大鼠血糖和氧化应激的影响,R587.1
  4. 小剂量螺内酯对2型糖尿病患者糖尿病肾病的抗氧化保护作用探讨,R587.2
  5. β-酷啡肽-5对糖尿病大鼠血糖和氧化应激的影响,R587.1
  6. 别嘌呤醇对舒张性心衰患者心功能的影响,R541.6
  7. 有氧运动对糖尿病大鼠胰腺组织氧化应激及超微结构的影响,R587.1
  8. Nrf2-ARE通路在离体鼠心缺血/吡那地尔后处理中作用的研究,R96
  9. 糖康对糖尿病大鼠和血管内皮细胞的作用及其机制研究,R285.5
  10. 丹酚酸A调控Nrf2通路对HepG2细胞氧化损伤保护机制的研究,R285.5
  11. 藁本内酯对抗D-半乳糖和过氧化氢致氧化应激损伤的神经保护作用,R285.5
  12. 缺血—再灌注损伤小鼠肾脏中解偶联蛋白2的表达及其意义,R587.1
  13. 窖蛋白-1在波动性高糖诱导的内皮细胞氧化应激损伤中的作用及机制,R587.1
  14. 全脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Ngb与Caspase-3的相关性研究,R741
  15. bFGF对鼠脑缺血/再灌注皮质区p-Akt（Ser473）、Fractalkine表达的影响,R743.3
  16. 丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,R743.33
  17. AMPK通路对急性光损伤模型中视网膜感光细胞的保护作用,R779.1
  18. 外源性PCr抗动物脑缺血再灌注损伤及脑源性MODS实验研究,R965
  19. 丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤TNF-α、NF-κB表达的影响,R285.5
  20. 低砷饮水暴露对心血管系统的影响及膳食营养因素作用的研究,R151
  21. 富勒醇对海马突触可塑性影响的离体研究,R741

中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脑血管疾病 > 急性脑血管疾病（中风）
© 2012 www.xueweilunwen.com